[发明专利]基于智能恒温扩增技术检测单核增生李斯特氏菌的引物组、试剂盒及方法

说明书

一种基于智能恒温扩增技术检测单核增生李斯特氏菌的引物组、试剂盒和方法。检测引物组包括TP引物、FP引物、BP引物、OP1引物和OP2引物；检测试剂盒包括引物液、反应液、Bst DNA聚合酶、错配结合蛋白、显色剂和对照。其检测方法是通过提取待检DNA，利用具有链置换活性的DNA聚合酶活性，采用四条特异性引物及一种错配结合蛋白，在60～65℃对样品DNA模板进行扩增，可检测到DNA的pg级，其鉴定方式是采用在反应体系中加入Green I并在ESE‑tube scanner仪器检测判断扩增与否，确定待检样品是否含有单核增生李斯特氏菌DNA。本发明具有快速高效、操作简便、高特异性、高灵敏度、鉴定简便、适合现场检测等优点，适于推广应用。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，涉及一种基于智能恒温扩增技术检测单核增生李斯特氏菌的引物组、试剂盒及方法。

背景技术

单核增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)是食品安全部门重点监管对象之，其对肉、奶、蛋、水产品及蔬菜等均有不同程度污染，以肉及肉制品污染最严重。故建立肉中单增李斯特菌快速、准确、定量、可靠的检测方法尤为重要。目前肉制品中常见致病菌检测方法操作繁琐、费时费力、灵敏度较低、特异性较差、易产生假阳性，无法不能满足快速鉴定单增李斯特菌发展需求。随着分子生物学的发展，出现了众多以分子生物学技术为基础的鉴定方法，如PCR-SSCP、PCR-RFLP、DNA探针、DNA芯片、DNA直接测序等，以其高效、特异等优点而受到青睐，但对检测人员技术水平要求高、仪器昂贵、检测周期长，为满足快速鉴别分类的需求，为科学研究提供快速方便的方法，缩短单核增生李斯特氏菌鉴别时间，降低鉴别技术难度和费用一直是相关研究的热点。所以，在食品检测和科学研究实践中均需要一种降低操作技术和费用、快速简便、容易普及、安全可靠的检测方法。

发明内容

有鉴于此，本发明所解决的技术问题在于提供一种基于智能恒温扩增技术检测单核增生李斯特氏菌的引物组。

本发明所解决的技术问题还在于提供一种基于智能恒温扩增技术检测单核增生李斯特氏菌的试剂盒。

本发明所解决的技术问题还在于提供一种基于智能恒温扩增技术检测单核增生李斯特氏菌的方法。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

一方面，本发明公开了一种基于智能恒温扩增技术检测单核增生李斯特氏菌的引物组，包括TP引物、FP引物、BP引物、OP1引物和OP2引物，其核苷酸序列分别如下所示:

FP引物：TTTATATATATATAAATCTCAGGTCATGTAGG

TP引物：TAGGACTGAACAATTACGGCTTTGAAGGAA

BP引物：ATATCATCAAAAAT

OP1引物：GGCGTACGCGGGAAATCT

OP2引物：CTTTTGCGGAGCCACCGT。

优选地，扩增反应时，TP引物、FP引物、BP引物、OP1引物和OP2引物的摩尔比为：8：8：4：1：1。

另一方面，本发明还公开了一种基于智能恒温扩增技术检测单核增生李斯特氏菌的试剂盒，该检测试剂盒中含有上述方案中所列的智能恒温扩增引物组。

优选地，该智能恒温扩增检测试剂盒还包括以下成分的部分或者全部：(1)DNA聚合酶；(2)错配结合蛋白；(3)智能恒温扩增反应液；(4)荧光显色剂；(5)阳性对照和阴性对照。

优选地，该智能恒温扩增检测试剂盒中，其引物中TP引物、FP引物、BP引物、OP1引物和OP2引物的摩尔比为：8：8：4：1：1。