[发明专利]一种用于检测I群禽腺病毒4型抗体的阻断ELISA试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一株I群禽腺病毒4型Hexon蛋白制备的杂交瘤细胞株、其分泌的单克隆抗体以及制备的用于检测I群禽腺病毒4型抗体的阻断ELISA试剂盒，所述试剂盒包括包被酶标板、辣根过氧化物酶标记的禽腺病毒4型单克隆抗体、洗涤液、血清稀释液、FAdV‑4标准阳性血清、FAdV‑4标准阴性血清、底物显色液、终止液；其中，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCC No.16203，所述禽腺病毒4型单克隆抗体由上述保藏编号为CGMCC No.16203的杂交瘤细胞株所分泌，所述包被酶标板以大肠杆菌系统表达的重组禽腺病毒4型Hexon蛋白作为包被抗原。本发明的试剂盒以阻断ELISA法为原理，检测禽血清样本中的I群禽腺病毒4型抗体，具有灵敏性和特异性高，重复性好，检测快速方便，易于标准化等优点，非常方便在基层养殖单位中推广使用。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种检测I群禽腺病毒抗体的阻断ELISA试剂盒及其检测方法和应用。

背景技术

2015年6月以来，我国山东、安徽、河北、河南、辽宁等省份，商品鸡群中爆发了以心包积液、肝脏肥大为特征的疾病。根据病变，暂将该其称为鸡心包积液-肝炎综合征。该疾病多发生于20～30日龄左右的肉鸡，发病后4～8日为死亡高峰期，病程为8～15天，死亡率达20％～30％。同时20～70日龄以及200～300日龄的蛋鸡也有发生，但死亡率较肉鸡低，经鉴定该疾病病原为禽腺病毒4型(Fowl adenovirus 4,FAdV-4)。

腺病毒是一种无囊膜的双链DNA病毒，禽腺病毒属于禽腺病毒科，禽腺病毒属，根据其抗原性的不同可分为I、II、III三个群，其中I群禽腺病毒包括12个血清型。新发现的腺病毒4型属于I群禽腺病毒(Fowl adenovirus group I,FAdV I)，具有共同的群抗原，该群病毒代表株为鸡胚致死孤儿病毒(Chicken Embro Lethal Orphan virus,CELOV)。

目前对于FAdV传统的实验室检测方法均存在一定的缺陷，如病毒的分离鉴定、中和试验、琼脂扩散试验等方法费时费力，结果不够精确，PCR、LAMP等对试剂盒设备要求较高且不便对大量样品进行检测，而ELISA方法具有简便、快速、特异性强等优点，从而可作为FAdV抗原和抗体检测的有效方法。

禽腺病毒4型编码的主要结构蛋白是六邻体蛋白(Hexon)，含有主要的属和亚属特异性抗原决定簇和次要的种特异性抗原决定簇，所以它与保护性免疫反应有关，可以作为诊断抗原。Hexon可以刺激机体产生抗体，抑制病毒体构象的改变，从而中和病毒，因此，建立基于Hexon蛋白的阻断ELISA方法比间接ELISA方法的特异性更高，对禽腺病毒4型抗体的临床检测具有更重要的意义。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供了一种检测I群禽腺病毒抗体的阻断ELISA试剂盒。

本发明的另一目的在于提供了一种简便、快速及准确检测I群禽腺病毒血清抗体的方法。

为实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

第一方面，本发明提供了一株分泌特异性结合I群禽腺病毒4型六邻体蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株的保藏号为CGMCC NO.16203。

本发明的杂交瘤细胞株已于2018年07月27日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.16203，保藏地点为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

第二方面，本发明还提供了一株特异性结合I群禽腺病毒4型六邻体蛋白的单克隆抗体，所述单克隆抗体由上述保藏号为CGMCC NO.16203的杂交瘤细胞株所分泌产生。

第三方面，本发明还提供了上述杂交瘤细胞株或单克隆抗体在制备I群禽腺病毒4型检测试剂盒中的应用，优选地，所述试剂盒为阻断ELISA试剂盒，可以特异性的检测样品中I群禽腺病毒4型六邻体蛋白的抗体。