[发明专利]用于检测rs1801133的引物探针组及其应用

说明书

本发明公开了一种用于检测rs1801133的引物探针组及其应用。本发明首先保护一种引物探针组，由引物F、引物R和探针P组成；引物F为序列表的序列1所示的单链DNA分子；引物R为序列表的序列2所示的单链DNA分子；探针P为一个末端具有荧光基团且另一个末端具有荧光淬灭基团的单链DNA分子，且DNA分子中的部分核苷酸为锁核酸，DNA分子的核苷酸序列为序列表的序列3所示。本发明可用于检测rs1801133，判断待测样本基于该位点的基因型，从而指导临床医生对于潜在疾病的预防与干预，具有重大的应用推广价值。

技术领域

本发明涉及一种用于检测rs1801133的引物探针组及其应用。

背景技术

MTHFR为5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶，主要作用是在叶酸代谢通路中将5,10-亚甲基四氢叶酸转化为具有生物学功能的5-甲基四氢叶酸。5-甲基四氢叶酸可以进一步进入甲基传递通路，通过同型半胱氨酸的重新甲基化过程间接为DNA甲基化和蛋白质甲基化提供甲基并且使血液中的同型半胱氨酸水平保持在一个较低的水平。此外叶酸的中间代谢产物在核苷酸合成过程中也有重要的作用，通过一碳单位代谢为嘌呤环的形成提供碳原子。MTHFR基因的缺陷将导致机体多个基础生化过程的紊乱，包括细胞周期调控、DNA复制、DNA以及蛋白质甲基化修饰等，并进而引发神经管缺陷、癌症、心脑血管疾病等多种病症。MTHFR基因的缺陷对孕妇人群会引起神经管缺陷、先天性心脏病、唇腭裂、妊娠期高血压疾病，引起自发性流产。

研究表明，MTHFR基因存在多种多态性的变化，多态性变化与亚甲基四氢叶酸还原酶的活性相关。其中677位核苷酸由C突变为T，使得该位点的胞嘧啶（C）被胸腺嘧啶（T）替代，对应于编码后丙氨酸被缬氨酸替代，导致亚甲基四氢叶酸还原酶的活性降低50％～60％。

针对MTHFR基因位点进行基因分型检测，可以有效预防该基因突变导致的多种病症，具有重要的临床意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测rs1801133的引物探针组及其应用。

本发明首先保护一种引物探针组，由引物F、引物R和探针P组成；

引物F为如下（a1）或（a2）：

（a1）序列表的序列1所示的单链DNA分子；

（a2）将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；

引物R为如下（b1）或（b2）：

（b1）序列表的序列2所示的单链DNA分子；

（b2）将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；

探针P为一个末端具有荧光基团且另一个末端具有荧光淬灭基团的单链DNA分子，且DNA分子中的部分核苷酸为锁核酸，DNA分子的核苷酸序列为如下（c1）或（c2）：

（c1）序列表的序列3所示；

（c2）将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加。

探针P为5’末端具有HEX荧光基团且3’末端具有BHQ1荧光淬灭基团的单链DNA分子。

具体来说，所述探针P的核苷酸序列如序列表的序列3所示，且第1-3位核苷酸和第22-24位核苷酸均为锁核酸。

所述引物探针组中，引物F、引物R、探针P的摩尔配比为：20：5：15。

本发明还保护所述引物探针组在制备用于检测rs1801133的试剂盒中的应用。

本发明还保护一种用于检测rs1801133的试剂盒，包括所述引物探针组。