[发明专利]用于检测rs1695的引物探针组及其应用

说明书

本发明公开了一种用于检测rs1695的引物探针组及其应用。本发明首先保护一种引物探针组，由引物F、引物R和探针P组成；引物F为序列表的序列1所示的单链DNA分子；引物R为序列表的序列2所示的单链DNA分子；探针P为一个末端具有荧光基团且另一个末端具有荧光淬灭基团的单链DNA分子，且DNA分子中的部分核苷酸为锁核酸，DNA分子的核苷酸序列为序列表的序列3所示。本发明可用于检测rs1695，判断待测样本基于该位点的基因型，从而指导用药，具有重大的应用推广价值。

技术领域

本发明涉及一种用于检测rs1695的引物探针组及其应用。

背景技术

临床中发现对分子分型、分期和病理类型相同的乳腺癌、结肠直癌、胰腺癌等给予标准方案化疗后，疗效及毒副反应的程度截然不同，差异的原因与药物代谢酶基因多态性有关。谷胱甘肽转移酶P1(Glutathione S-transferase P1,GSTP1)基因具有多态性，与药物代谢酶的活力有关，可能影响一些癌症化疗的疗效和毒性以及预后。

研究表明，GSTP1基因多态性是由于562位核苷酸由A突变为G，导致该位氨基酸由异亮氨酸突变为缬氨酸，从而引起对应谷胱甘肽转移酶P1活性的改变。谷胱甘肽转移酶P1属于Ⅱ相代谢酶，是重要的外源性化学物质代谢酶，与一些致癌剂的体内代谢有关，参与机体解毒，其活性改变可以引起癌症患者对化疗药物代谢能力改变。其中AG/GG基因型患者的化疗疗效优于AA基因型，携带G基因患者的化疗有效率高于携带A基因的患者。其基因多态性也与癌症患者化疗后发生中性粒细胞减低并发症有关，其中GSTP1 AG/GG基因型比AA基因型更易发生重度中性粒细胞减低毒性，且在联合化疗时该现象更为明显。对AG/GG基因型的患者，化疗后24小时后给予皮下注射G-CSF可保障患者如期完成化疗。该位点的多态性在癌症药物如奥沙利铂、卡培他滨、氟尿嘧啶、亚叶酸钙、奥沙利铂等的代谢中，AA基因型出现副作用的风险最高，生存率降低，其次是AG型，GG型毒副作用风险最低，生存率较高。

对该基因位点多态性进行基因分型分析，可以指导医生对于不同癌症患者采取更加具有针对性的治疗方案，具有重要的临床意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测rs1695的引物探针组及其应用。

本发明首先保护一种引物探针组，由引物F、引物R和探针P组成；

引物F为如下（a1）或（a2）：

（a1）序列表的序列1所示的单链DNA分子；

（a2）将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；

引物R为如下（b1）或（b2）：

（b1）序列表的序列2所示的单链DNA分子；

（b2）将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；

探针P为一个末端具有荧光基团且另一个末端具有荧光淬灭基团的单链DNA分子，且DNA分子中的部分核苷酸为锁核酸，DNA分子的核苷酸序列为如下（c1）或（c2）：

（c1）序列表的序列3所示；

（c2）将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加。

探针P为5’末端具有FAM荧光基团且3’末端具有BHQ1荧光淬灭基团的单链DNA分子。

具体来说，所述探针P的核苷酸序列如序列表的序列3所示，且第1-3位核苷酸和第26-28位核苷酸均为锁核酸。

所述引物探针组中，引物F、引物R、探针P的摩尔配比为：5：20：10。

本发明还保护所述引物探针组在制备用于检测rs1695的试剂盒中的应用。