[发明专利]用于改变里氏木霉菌丝形态的重组表达载体及其应用

说明书

本发明属于农业生物技术领域，具体涉及用于改变里氏木霉菌丝形态的重组表达载体及其应用。本发明构建含有barA1基因和/或barA2基因的重组表达载体，并用其转化里氏木霉，得到菌性形态改变的重组里氏木霉，进而提高了里氏木霉的蛋白表达量和纤维素酶酶活。

技术领域

本发明属于农业生物技术领域，具体涉及用于改变里氏木霉菌丝形态的重组表达载体及其应用。

背景技术

丝状真菌具有菌丝极性生长的独有特性，其能产生一种热稳定性抗真菌因子类化合物，该类化合物能够调节菌丝端点处隔膜和甲酸精定位，进而影响菌丝极性的生长。里氏木霉(Trichoderma reesei)是当今生产纤维素酶的主要工业丝状真菌，其纤维素酶产量高、稳定性好、易于分离纯化。里氏木霉不但具有菌丝极性生长的丝状真菌特性，而且里氏木霉也具有好氧真菌的特性，其产酶过程和线粒体的呼吸代谢紧密相关。在液体发酵过程中，一方面里氏木霉需要充足的氧气来维持细胞的生长、代谢和产酶，另一方面极性生长、粘度高的菌丝则严重阻碍搅拌和氧气传递，导致细胞生长代谢活动减慢，生长发育迟缓甚至凋亡。

因此，现有的里氏木霉的菌丝形态导致发酵过程中溶氧及氧气传递能力较低，进而影响其蛋白生产能力，使其不能满足工业上的需求。

发明内容

为了解决现有的里氏木霉溶氧能力差、蛋白产量不能满足工业需要的问题，本发明提供一种用于改变里氏木霉菌丝形态的重组表达载体。

本发明的目的在于提供用于改变里氏木霉菌丝形态的重组表达载体。

本发明的再一目的在于提供含有上述载体的重组里氏木霉。

本发明的再一目的在于提供含有上述载体的重组里氏木霉的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述重组表达载体的应用。

本发明提供了用于改变里氏木霉菌丝形态的重组表达载体，所述重组表达载体中包括barA1基因和/或barA2基因。

根据本发明的具体实施方式，用于改变里氏木霉菌丝形态的重组表达载体的基因表达盒中由上游到下游依次包括表达原件：pdc1启动子、barA1基因和/或barA2基因、eno1启动子，其中，所述barA1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述barA2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

barA1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示：

ACTGACACCACTGGCGGAAGCCTGCTTCTTAAGCCCGTTGCGTCGCTCCCAGCTCTTGAGGTCCAGCTCTTCCACGCCCACCTCCTGCTCCAGCGGCTGCACCTCTTCGTAGATGAGCTCCTCCTCGTCCTCTCCCTCCTCACCCTCGTCATCGCTTCGGGTATCCTCTGCGCCGTCTCCGCGGAGAACCTTGATGGCAACGCGGACGATCATGCAGAACCAGAAAATCGTAATGCCCTGCAGCAGGAGGAGGGGCGTGAGGAAAGCCCACTTGACCGTCTCGTTGTAGCACACGCGACCCGTCGAGTTGAAGAAGGGCTCAATCAGGTACGTGAAGCCCGAGGGGGCTTCAAAGGGGCCCTGCAGCGACGAATTCGGTCCGGCGAAGCATCCGTTGGGCATGATCTCGGGGGTGTGGGCGTAGATGGACCAGCAGACGGCCAGGTAGAAGACGTGACGCGCGATGAACCAGGTCACCATGAAGAGGCCAAAGGTCACGTCGCACAGCGTGGAGAAGCCGC

barA2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示: