[发明专利]检测Septin9基因启动子是否甲基化的方法及其专用成套试剂

说明书

本发明公开了一种检测Septin9基因启动子是否甲基化的方法及其专用成套试剂。成套试剂包括引物对septin9和探针SEPT9；引物对septin9由引物septin9 FP和引物septin9 RP组成；已甲基化的Septin9基因启动子中，引物对septin9的靶序列含有序列表的序列3所示的单链DNA分子；探针SEPT9为15‑25个核苷酸组成的单链DNA分子，与序列表的序列3中的部分区段相同。实验证明，采用本发明提供的成套试剂可以检测Septin9基因启动子是否甲基化，从而早期诊断结直肠癌，而且具有较高的灵敏度(达到5％)和特异性。本发明具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及检测Septin9基因启动子是否甲基化的方法及其专用成套试剂。

背景技术

结直肠癌包括结肠癌和直肠癌，是人类常见的下消化道恶性肿瘤，早期症状不明显，随着癌肿的增大而表现排便习惯改变、便血、腹泻、腹泻与便秘交替、局部腹痛等症状，晚期则表现贫血、体重减轻等全身症状。结直肠癌的早期诊断是获得高治愈率的基础，也能显著降低结直肠癌的死亡率。目前，对于结直肠癌的检测主要有直肠指检、大便隐血(FOBT)试验、内镜检查、钡剂灌肠等，而作为结直肠癌诊断金标准的肠镜是一种创伤性检测手段，检测过程繁琐痛苦且有出血感染风险，显然不适合作为筛查手段。因此，建立一种高效、准确、快速、低价的检测结直肠癌的方法，对早期结直肠癌的临床筛查工作至关重要。

Septin9基因是一类具有三磷酸鸟苷酶活性的保守基因家族成员之一，其与染色体分离、DNA修复、迁移和掉网等许多细胞功能有关。Septin9基因与恶性肿瘤等人类疾病密切相关，已成为现阶段肿瘤研究的热点。Septin9基因的启动子在结直肠癌组织中高度甲基化，是结直肠癌的重要分子特征，可用于结直肠癌的早期诊断。

发明内容

本发明的目的是检测Septin9基因启动子是否甲基化，从而早期诊断结直肠癌。

本发明首先保护一种成套试剂，可包括引物对septin9和探针SEPT9；所述引物对septin9可由引物septin9FP和引物septin9RP组成。

已甲基化的Septin9基因启动子中，所述引物对septin9的靶序列可含有特异DNA片段甲。所述特异DNA片段甲可为序列表的序列3所示的单链DNA分子(序列表中序列3中含有5个CpG位点)。

所述探针SEPT9可为15-25个核苷酸组成的单链DNA分子，与所述特异DNA片段甲中的部分区段相同。

未甲基化的Septin9基因启动子中，所述引物对septin9的靶序列可含有特异DNA片段乙。所述特异DNA片段乙可为序列表的序列4所示的单链DNA分子。

所述引物septin9FP可为如下a1)或a2)：

a1)序列表中序列1所示的单链DNA分子；

a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的单链DNA分子。

所述引物septin9RP可为如下b1)或b2)：

b1)序列表中序列2所示的单链DNA分子；

b2)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的单链DNA分子。

所述探针SEPT9可为如下c1)或c2)：

c1)序列表中序列6所示的单链DNA分子；

c2)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列6具有相同功能的单链DNA分子。

所述引物septin9RP自5′末端起第5位的核苷酸(C)具体可为具有C3Spacer修饰的C。