[发明专利]重组融合细胞因子IL-7-Linker-IL-15腺病毒及其构建和应用

说明书

本发明公开了一种重组融合细胞因子IL‑7‑Linker‑IL‑15腺病毒的构建方法，首先构建pDC316‑IL‑7‑Linker载体，然后将IL‑15片段通过基因克隆的方法连到pDC316‑IL‑7‑Linker上，构建pDC316‑IL‑7‑Linker‑IL‑15；最后将pDC316‑IL‑7‑Linker‑IL‑15和骨架载体pBHGlox△E1、3Cre共转染HEK293细胞进行包装，得到表达融合细胞因子IL‑7‑Linker‑IL‑15的腺病毒。重组IL‑7‑Linker‑IL‑15腺病毒作为佐剂应用在结核亚单位疫苗中，调控疫苗免疫后记忆性T细胞的分化，增强了疫苗诱导的中央记忆性T细胞介导的免疫应答，提高了结核亚单位疫苗的免疫保护作用。

技术领域

本发明具体涉及一种重组融合细胞因子IL-7-Linker-IL-15腺病毒的构建；本发明同时还涉及该融合细胞因子IL-7-Linker-IL-15作为细胞免疫佐剂在结核亚单位疫苗中的应用策略，属于疫苗制造技术领域。

背景技术

结核病（tuberculosis）是一种主要由结核分枝杆菌感染（Mycobacteria tuberculosis）引起的慢性传染性疾病。其病死率在传染性疾病中已经居于第一位，是全世界的第九大死因。预防和控制传染病的最佳方式就是有效疫苗的接种，结核病难于控制的主要原因是缺乏有效的结核病疫苗。目前唯一临床批准的预防结核病的疫苗是牛分枝杆菌减毒活疫苗卡介苗（Bacille Calmette-Guérin，BCG）。它可以有效控制儿童严重结核病的发生，但是对成人肺结核的保护效果不确定，保护性免疫应答随着年龄的增加逐渐减弱。研究报道，主要是因为BCG的持续刺激，诱导更多的寿命较短的效应记忆性T细胞和效应T细胞产生，而提供长效免疫保护效果的中央记忆性T细胞较少所致。蛋白亚单位疫苗是一种新型的结核疫苗，它需要佐剂的辅助诱导较强的免疫应答，合适的佐剂能提高免疫应答的水平。目前临床上获批的佐剂很少，它们主要促进体液免疫应答。因此，研发新的可诱导T细胞免疫应答的佐剂，提高中央记忆T细胞的数量、增强长效的保护效果是目前的当务之急。

一些研究表明：IL-7和IL-15对于记忆T细胞的发育和维持至关重要，具有促进免疫记忆的作用。IL-7和IL-15活化不同的受体及信号通路调控淋巴细胞的发育分化。我们将IL-7和IL-15进行融合构建一种融合细胞因子IL-7-Linker-IL-15，设想他们同时作用于IL-7R和IL-15R激活相关信号分子，作为佐剂应用在结核亚单位疫苗中，调控疫苗免疫后免疫记忆性T细胞的分化，增强中央记忆性T细胞的分化和维持较为长久的免疫记忆，增强结核亚单位疫苗的免疫保护作用。

发明内容

本发明的目的提供一种由IL-7和IL-15进行融合构建的重组融合细胞因子IL-7-Linker-IL-15的腺病毒；

本发明的另一目的，是提供一种上述重组融合细胞因子IL-7-Linker-IL-15腺病毒的构建方法；

本发明还有一个目的，就是提供上述重组融合细胞因子IL-7-Linker-IL-15腺病毒作为佐剂在结核亚单位疫苗中的应用，分析重组融合细胞因子IL-7-Linker-IL-15的佐剂效应。

一、重组融合细胞因子IL-7-Linker-IL-15腺病毒的构建、包装