[发明专利]一种三明治夹心结构SERS检测病原菌的方法

权利要求书

1.一种三明治夹心结构SERS检测病原菌的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)抗菌肽功能化磁性纳米粒子的制备：

将磁性纳米粒子经表面羧基化修饰后与抗菌肽进行缩合反应，得到抗菌肽功能化磁性纳米粒子；

(2)对巯基苯硼酸修饰的氧化石墨烯-银包金纳米复合物SERS探针的制备：

将氧化石墨烯经巯基化修饰后与银包金纳米粒子混合反应，得到氧化石墨烯-银包金纳米复合物，然后与对巯基苯硼酸混合反应，得到对巯基苯硼酸修饰的氧化石墨烯-银包金纳米复合物SERS探针；

(3)三明治夹心结构SERS检测病原菌：

(a)将抗菌肽功能化磁性纳米粒子和细菌进行孵育，在外磁场作用下将吸附了细菌的磁性纳米粒子分离出来，得到磁性纳米粒子-细菌复合物；

(b)将步骤(a)的磁性纳米粒子-细菌复合物和对巯基苯硼酸修饰的氧化石墨烯-银包金纳米复合物SERS探针共孵育，形成抗菌肽功能化磁性纳米粒子-细菌-SERS探针所组成的三明治夹心结构，在外磁场的作用下将该三明治夹心结构分离出来；

(c)将步骤(b)分离得到的三明治夹心结构通过SERS对不同细菌进行检测鉴别。

2.根据权利要求1所述的一种三明治夹心结构SERS检测病原菌的方法，其特征在于：步骤(1)中所述磁性纳米粒子是指Fe₃O₄或MnFe₂O₄。

3.根据权利要求1所述的一种三明治夹心结构SERS检测病原菌的方法，其特征在于步骤(1)中所述表面羧基化修饰的方法如下：

将磁性纳米粒子与正硅酸乙酯混合反应，得到硅烷化磁性纳米粒子，然后与羧基乙基硅烷三醇钠盐混合反应，得到表面羧基化修饰的磁性纳米粒子。

4.根据权利要求1所述的一种三明治夹心结构SERS检测病原菌的方法，其特征在于：步骤(1)中所述抗菌肽是指杆菌肽、蛙皮素、多粘菌素E或爪蟾素。

5.根据权利要求1所述的一种三明治夹心结构SERS检测病原菌的方法，其特征在于步骤(2)中所述巯基化修饰的方法如下：

将氧化石墨烯分散到无水乙醇中，然后加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺缩合剂，搅拌混合均匀后加入巯基乙胺反应，得到巯基化氧化石墨烯。

6.根据权利要求1所述的一种三明治夹心结构SERS检测病原菌的方法，其特征在于步骤(2)中所述银包金纳米粒子通过如下方法制备得到：

搅拌条件下将HAuCl₄加入到沸腾的超纯水中，然后加入柠檬酸钠搅拌反应，得到金纳米粒子的分散液，冷却到室温，然后加入抗坏血酸溶液搅拌混合均匀，滴加AgNO₃溶液搅拌反应，得到银包金纳米粒子。

7.根据权利要求1所述的一种三明治夹心结构SERS检测病原菌的方法，其特征在于：步骤(2)中所述银包金纳米粒子与氧化石墨烯的质量比为(0.5～15):1。

8.根据权利要求7所述的一种三明治夹心结构SERS检测病原菌的方法，其特征在于：所述银包金纳米粒子与氧化石墨烯的质量比为10:1。