[发明专利]一种粪菌冷冻保存液及其保存方法

说明书

本发明涉及医疗技术领域，具体涉及一种粪菌冷冻保存液及其保存方法，冷冻保存液按重量百分比包括以下组分：1‑5％的甘油，1‑3％胰蛋白胨，0.1‑0.5％维生素B，0.7‑0.9％生理盐水，余量为粪菌提取液配制而成；利用发明的粪菌保存液配合程序降温，控制粪菌降温速度和时间，使粪菌液在‑80℃保存时间长达2年以上，远高于一般实验室3‑6个月的粪菌储存时间；对于实验室粪菌的储存和粪菌样本库的建设提供了坚实的基础。

技术领域

本发明涉及医疗技术领域，具体涉及一种粪菌冷冻保存液及其保存方法。

背景技术

粪菌移植技术是指将健康人粪便中的功能菌群分离出来，通过胃肠镜、肠镜、灌肠等形式移植到患者肠道内，重建患者的肠道菌群，实现肠道及肠道外疾病治疗的技术。早在1700年前，东晋时期葛洪就在《肘后备急方》中写到用粪便可以治疗食物中毒和腹泻。李时珍的《本草纲目》中也记载用黄龙汤(粪便)治疗疾病。国外最早于1985年报道了粪菌移植可以治病的案例，Eiseman等用健康人的粪便悬浮液救治了伪膜性肠炎患者。肠道菌群的异常不仅会引起肠道内疾病，如炎症性肠病、结直肠癌、肠易激综合征、克罗恩病等，还与肥胖、糖尿病等慢性代谢疾病相关，粪菌移植的技术和理念正在被越来越多的人认可。因此，越来越多的科学研究希望运用FMT技术治疗相关疾病。

由于人体肠道内特殊的厌氧环境，人体肠道存在1000多种微生物，但其中约80％微生物无法在体外培养，因而对其功能知之甚少。现有的益生菌补充剂仅包含几种复合的肠道菌种，当患者的肠道菌群结构遭到严重破坏时，补充这几种益生菌后产生的疗效作用非常有限。近年研究表明，粪菌移植在治疗艰难梭菌感染和其他胃肠道疾病的神奇功效被大量患者和医院接受和认可。但是，粪菌移植重要的环节是获得健康人粪便，并将粪便中的微生物进行分离制备后保存粪菌活性。因此，将健康粪菌有效储存，在病人需要时及时提供高效、安全的粪菌液，成为该移植技术的关键环节。

有关粪菌液的保存方法有很多，但是这些方法都存在一定缺陷：这些方法要么不能长期保存粪菌液，要么粪菌液保存后大量菌群失活。例如将粪菌液直接冻存于-80℃冰箱，此方法中粪菌在没有保护液保护的情况下，迅速降温过程中细菌会被冰晶“冻伤”，导致细菌活力下降，超过一定时间，细菌也会出现大量死亡，粪便中细菌种类和丰度都会下降，一些菌群失活会引起粪菌液在进行FMT时的效果不佳。现有技术中也有利用EDTA盐及柠檬酸钠等物质，以水和乙醇作为溶剂配制的保存液能够将粪便样本在密封常温下保存一周，但这种方法不适于粪菌中长期保存，而且此种方法保存的粪菌液需要在粪菌移植之前进行离心处理以剔除保护液中一些成分，这样处理，菌液中的有益成分也随之丢失，从而降低了粪菌液的功效。

发明内容

(一)解决的技术问题

本发明针对上述存在的问题，提供一种粪菌冷冻保存液及其保存方法，冷冻保存液对粪菌中的微生物起到很好的保护作用，能够有效保持其生物活性，保持粪菌中原有的微生物组成和丰度。同时，我们对粪菌保存时的温度进行程序降温处理，以最大限度的保护粪菌中微生物的活性，对粪菌移植中粪菌的保存意义重大。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：

一种粪菌冷冻保存液，按重量百分比包括以下组分：1～5％的甘油，1～3％胰蛋白胨，0.1～0.5％维生素B，0.7～0.9％生理盐水，余量为粪菌提取液。

优选的，按重量百分比包括以下组分：1～4％的甘油，1～3％胰蛋白胨，0.1～0.3％维生素B，0.8～0.9％生理盐水，余量为粪菌提取液。

优选的，3％的甘油，2％胰蛋白胨，0.3％维生素B，0.9％生理盐水，余量为粪菌提取液。

优选的，其保存方法包括以下步骤：