[发明专利]一种凝胶电泳迁移实验的转膜方法

说明书

本发明公开了一种凝胶电泳迁移实验的转膜方法，即根据凝胶大小，将滤纸和尼龙膜裁剪为与所述凝胶相同大小；按照滤纸‑尼龙膜‑凝胶‑滤纸的顺序，从下向上放置实验材料，制备成转膜块；将4℃冷藏后的新鲜配制的转膜液1‑5ml，均匀喷洒在转膜块上，后将转膜块放入半干转膜仪中完成转膜。本发明提供了一种凝胶电泳迁移实验的转膜方法，克服了传统湿转，其耗时较长，且试剂消耗量大，总体效率低的技术缺陷，达到了可在15min内完成转膜，提高了转膜效率的目的，对EMSA实验具有优化效果。

技术领域

本发明涉及蛋白检测技术领域，特别是涉及一种凝胶电泳迁移实验的转膜方法。

背景技术

通过电泳区分不同的组分，并转移至固相支持物，通过特异性试剂(抗体)作为探针，对靶物质进行检测，蛋白质的Western印迹技术结合了凝胶电泳的高分辨率和固相免疫测定对靶物质进行检测，蛋白质的Western印迹技术结合了凝胶电泳的高分辨率和固相免疫测定。

其中在电流的作用下，使蛋白质从胶转移至固相载体(膜)上，是蛋白质的Western印迹技术的核心环节，但是，传统的凝胶电泳迁移实验(EMSA)中，需要将凝胶上的蛋白质与探针转移到尼龙膜上，以完成后续的电化学发光实验。通常使用的电转移方法为湿转，电压为100v-120v之间，转膜时间为30min-60min，其耗时较长，且试剂消耗量大，总体效率低。

因此，发明一种凝胶电泳迁移实验的转膜方法，充分提高转膜效率，减少转膜时间，对实验的整体流程具有优化效果，是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种凝胶电泳迁移实验的转膜方法，充分提高转膜效率，减少转膜时间，对实验的整体流程具有优化效果，能够应用于EMSA实验和SouthernBlotting的实验中。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种凝胶电泳迁移实验的转膜方法，包括以下步骤：

(1)根据凝胶大小，将滤纸和尼龙膜裁剪为与所述凝胶相同大小；

(2)其中按照滤纸-尼龙膜-凝胶-滤纸的顺序，从下向上放置实验材料，制备成转膜块；

(3)将4℃冷藏后的新鲜配制的转膜液1-5ml，均匀喷洒在步骤(2)中所述转膜块上，后将所述转膜块放入半干转膜仪中；

(4)打开仪器开关，设置转膜电压为25-30V，恒流电流为1A-0.3A，转膜时间为5min-15min；

(5)转膜完成后进行电化学发光实验和凝胶成像系统拍照。

本发明提供了一种凝胶电泳迁移实验的转膜方法，克服了传统湿转，其耗时较长，且试剂消耗量大，总体效率低的技术缺陷，达到了可在15min内完成转膜，提高了转膜效率的目的。

进一步地，步骤(2)的具体方法为：先将三层所述滤纸铺在底部，并去气泡；再将所述尼龙膜纸铺在所述滤纸上，并去气泡；将所述凝胶覆盖在所述尼龙膜上，并去气泡；最后再将三层所述滤纸覆盖在所述凝胶上。

其中滤纸、胶、膜之间不能有气泡，气泡的形成会造成短路。

进一步地，所述转膜液为0.5×TBE。

一种凝胶电泳迁移实验的转膜方法在EMSA实验或Southern Blotting实验中应用。

经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明提供了一种凝胶电泳迁移实验的转膜方法，具有如下技术优点：

本发明提供了一种凝胶电泳迁移实验的转膜方法，克服了传统湿转，其耗时较长，且试剂消耗量大，总体效率低的技术缺陷，达到了可在15min内完成转膜，提高了转膜效率的目的，对EMSA实验具有优化效果。

附图说明