[发明专利]无血清T淋巴细胞培养基、其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种无血清T淋巴细胞培养基，其包括DMEM/F12培养基、人血清白蛋白、人过氧化氢酶、蛋氨酸脑啡肽、干细胞生长因子、人转铁蛋白、亚油酸、叶酸、白介素4、白介素2、次黄嘌呤、膦胺霉素、庆大霉素、IL‑7、IL‑15异二聚体等组分。本发明还公开制备所述培养基的方法及利用其培养T淋巴细胞的方法。本发明提供的培养基在用于培养人源T淋巴细胞时，通过培养基中各组分的协同作用，可以使人源T淋巴细胞高效扩增，并保持较高的免疫细胞功能，为后续回输病人体内的基因修饰淋巴T细胞的质量提供保障，以便能够特异杀伤其抗原靶向的肿瘤细胞，同时其还具有保质期长，易于制备等优点。

技术领域

本发明涉及一种人源T淋巴细胞培养基，特别涉及一种无血清T淋巴细胞培养基、其制备方法与应用，属于生物医疗技术领域。

背景技术

目前，肿瘤免疫细胞治疗已越来越被人们青睐，它被认为是21世纪肿瘤综合治疗模式中最有发展前途的治疗手段。肿瘤免疫细胞治疗技术是运用生物技术和生物制剂从患者体内分离免疫细胞进行体外培养、激活和扩增后，回输到患者体内，直接杀伤或激发机体免疫反应来杀伤肿瘤细胞，达到治疗肿瘤目的。在基因修饰免疫细胞治疗领域，CAR-T疗法(嵌合抗原受体T细胞免疫疗法)、TCR-T疗法(T细胞受体修饰的T细胞疗法)等已经得到了越来越广泛的应用。在免疫细胞治疗过程中，人源T淋巴细胞的培养是必不可少的。一般来说，在培养人源T淋巴细胞时，不仅需要营养比例协调且丰富的培养基来帮助其维持生长，更需要培养基在能够促进其高速扩增的同时肿瘤杀伤能力不会减弱。现有的细胞培养基，如RPMI1640、DMEM/F12培养基等，虽然能基本维持抗原特异性T细胞的生长所需营养，但仍存在一些缺陷，例如不能有效促进其增殖，以及培养后肿瘤杀伤能力减弱等问题。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种免疫细胞培养基与其应用，以克服现有技术中的不足。

为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：

本发明实施例提供了一种无血清T淋巴细胞培养基，其包括DMEM/F12培养基、人血清白蛋白500.0mg/L～3000.0mg/L、人过氧化氢酶200.0mg/L～2200.0mg/L、蛋氨酸脑啡肽385mg/L～425mg/L、干细胞生长因子5mg/L～40mg/L、人转铁蛋白40～180mg/L、亚油酸100.0mg/L～1200.0mg/L、叶酸2.45mg/L～2.65mg/L、白介素410mg/L～80mg/L、白介素217～70mg/L、次黄嘌呤1mg/L～3mg/L、膦胺霉素10IU/ml～40IU/ml、庆大霉素10IU/ml～50IU/ml、IL-77μg/L～9μg/L、IL-15异二聚体3μg/L～5μg/L、亚硒酸钠维生素e 0.5mg/L～5mg/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠30mmol/L～45mmol/L。

本发明实施例还提供了所述无血清T淋巴细胞培养基的制备方法，其包括：

将人血清白蛋白、人过氧化氢酶、蛋氨酸脑啡肽、干细胞生长因子、人转铁蛋白、白介素4、白介素2、次黄嘌呤、IL-7、IL-15异二聚体、溶于未加碳酸氢钠的DMEM培养基中，形成第一溶液；

将亚油酸、叶酸、亚硒酸钠维生素e溶于无水乙醇中，形成第二溶液；

将第一溶液、第二溶液与4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠、膦胺霉素、庆大霉素混合，再以DMEM/F12培养基稀释，形成所述无血清T淋巴细胞培养基。

本发明实施例还提供了所述的无血清T淋巴细胞培养基在培养T淋巴细胞中的应用。

本发明实施例还提供了一种T淋巴细胞培养方法，其包括：采用所述的无血清T淋巴细胞培养基培养T淋巴细胞。