[发明专利]一种植物病毒弱毒疫苗组合物、弱毒疫苗保存方法及其应用

说明书

本发明涉及农业科学领域，公开了一种植物病毒弱毒疫苗组合物、弱毒疫苗保存方法及其应用。植物病毒弱毒疫苗组合物包括携带植物病毒弱毒疫苗的发酵菌体、轻质碳酸钙、黄腐酸和黄原胶。携带植物病毒弱毒疫苗的发酵菌体与轻质碳酸钙的体积比为1:1。黄腐酸和黄原胶的添加量与发酵菌体和轻质碳酸钙混合物的关系为：每10ml发酵菌体和轻质碳酸钙混合物中加入50mg黄腐酸和50mg黄原胶。本发明的组合物和方法可以延长弱毒疫苗的保存时间，提高货架期，有利于弱毒疫苗的广泛应用，可以大大减少损失。

技术领域

本发明涉及农业科学领域，具体地，本发明涉及一种植物病毒弱毒疫苗组合物、弱毒疫苗保存方法及其应用。

背景技术

病毒病是农业生产中的重要病害之一，严重影响作物的产量和品质，造成巨大损失。目前市场上没有防治作物病毒病的特效药剂，因而作物病毒病的防治十分困难。交叉保护是防治植物病毒病的有效手段。随着技术的进步，现在可以构建病毒的侵染性克隆，通过反向遗传学技术筛选致病力显著下降、能保护作物免受强毒株系侵染的弱毒疫苗，在作物苗期提前接种，可有效防治病毒病。

植物病毒弱毒疫苗需要利用农杆菌来进行生产，借助农杆菌来接种植物。但农杆菌常温下存活时间不长，经过一段时间后活菌数会大量下降，因而携带植物病毒弱毒疫苗的农杆菌不能长期保存，影响了植物病毒弱毒疫苗的广泛应用。

有鉴于此特提出本发明。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于克服现有技术的不足，提供一种植物病毒弱毒疫苗组合物、弱毒疫苗保存方法及其应用。本发明通过使用轻质碳酸钙干燥携带弱毒疫苗的农杆菌体，并加入黄腐酸和黄原胶，可延长弱毒疫苗保存时间，提高货架期，有利于弱毒疫苗的广泛应用。

为解决上述技术问题，本发明采用技术方案的基本构思是：

本发明的第一目的是提供一种植物病毒弱毒疫苗组合物，植物病毒弱毒疫苗组合物包括携带植物病毒弱毒疫苗的发酵菌体、轻质碳酸钙、黄腐酸和黄原胶。

进一步的方案，携带植物病毒弱毒疫苗的发酵菌体与轻质碳酸钙的体积比为1:1。

进一步的方案，所述的组合物中黄腐酸和黄原胶的质量比为1:1。

进一步的方案，所述的黄腐酸和黄原胶的添加量与发酵菌体和轻质碳酸钙混合物的关系为：每10ml发酵菌体和轻质碳酸钙混合物中加入50mg黄腐酸和50mg黄原胶。

本发明通过在携带植物病毒弱毒疫苗的农杆菌体中加入黄腐酸和黄原胶，证明能有效延长保存期，进而通过不同浓度梯度的筛选最终确定每10ml轻质碳酸钙粉剂加入50mg黄腐酸和50mg黄原胶的配方比例保存效果最好，可将植物病毒弱毒疫苗的保存期延长2个月以上。

进一步的方案，所述的植物病毒弱毒疫苗包括抗马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒、黄瓜花叶病毒、烟草花叶病毒中至少一种的弱毒疫苗。

进一步的方案，所述的植物病毒弱毒疫苗包括以TVBMV弱毒突变体为载体，TVBMV弱毒突变体中嵌入了可诱导对马铃薯X病毒、和/或马铃薯Y病毒、和/或黄瓜花叶病毒、和/或烟草花叶病毒产生交叉保护的有效基因片段；

或者，所述的植物病毒弱毒疫苗包括马铃薯X病毒、和/或马铃薯Y病毒、和/或黄瓜花叶病毒、和/或烟草花叶病毒突变的弱毒毒株；

优选的，所述的植物病毒弱毒疫苗包括马铃薯Y病毒突变弱毒毒株，HC-Pro第182位的K突变为R。

进一步的方案，可诱导对马铃薯X病毒产生交叉保护的有效基因片段包括马铃薯X病毒的RdRp基因，其核苷酸序列如Seq ID No.13、或Seq ID No.14所示、或Seq ID No.15所示；