[发明专利]一种重组腺相关病毒或含其的试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种重组腺相关病毒或含其的试剂盒在制备诊断制品中的用途，其中，所述诊断制品用于筛查重组腺相关病毒基因治疗发生免疫反应几率。本发明用途安全，可有效判断患者发生免疫反应的几率。

技术领域

本发明涉及生物制剂领域，尤其涉及一种重组腺相关病毒或含其的试剂盒及其应用。

背景技术

基因治疗是指将外源正常靶基因导入到靶细胞中，以纠正或补偿由于基因缺陷或异常导致的疾病，包括基因修正和基因替代，而基因载体的发展对基因治疗起了重要的推动作用。在众多载体中，病毒载体因具有长期基因表达和较高的感染效率而广泛应用于基因治疗中，尤其是具有显著优势的腺相关病毒载体。

腺相关病毒是基因治疗中应用最为广泛的载体之一，重组腺相关病毒(recombinant AAV，rAAV)或称重组腺相关病毒载体具有非致病性、低免疫原性、特异性位点整合以及稳定表达目的基因等特性，使其在众多病毒中脱颖而出成为其中的佼佼者。

基因治疗中，如果参加基因治疗的患者其血清中具有腺相关病毒的抗体，采用rAAV进行基因治疗时会引起免疫反应。此时该种患者不适合直接进行基因治疗，需要接受免疫治疗后才能进行基因治疗。然而，现有技术中缺乏一种鉴别患者是否适合直接进行基因治疗的方法。

发明内容

本发明解决的技术问题是为克服患者在重组腺相关病毒基因治疗过程中有发生免疫反应风险的缺陷，提供一种重组腺相关病毒或含其的试剂盒及其应用。

为解决以上技术问题，本发明的技术方案之一为：一种重组腺相关病毒或含其的试剂盒在制备诊断制品中的用途，其中所述诊断制品用于筛查重组腺相关病毒基因治疗发生免疫反应几率。

优选地，所述重组腺相关病毒含报告基因。

更优选地，所述报告基因为荧光蛋白，优选绿色荧光蛋白(green fluorescentprotein，GFP)、深红色荧光蛋白、红色荧光蛋白、黄色荧光蛋白或橙色荧光蛋白。进一步更优选地，所述绿色荧光蛋白GFP为增强绿色荧光蛋白EGFP、Emerald、sfGFP、超折叠GFP或ZsGreen1珊瑚分离蛋白，所述红色荧光蛋白为mCherry、mPlum或mStrawberry，所述黄色荧光蛋白为ZsYellow1、mCitrine、mVenus或YPet，所述橙色荧光蛋白为mOrange、TagRFP、mKO或dTomato。

如本文所用的术语“重组”，作为对载体例如病毒以及序列例如重组多核苷酸和多肽的修饰时，意指所述载体或序列已经被以人工的方式操纵。重组病毒的具体示例是将其中通常不存在于野生型病毒基因组中的多核苷酸插入到病毒基因组内。在本发明中，重组腺相关病毒或重组腺相关病毒载体为将异源多核苷酸(例如报告基因)克隆到腺相关病毒序列内。虽然术语“重组”在本文中不总是参照病毒载体例如AAV病毒和载体序列以及多核苷酸和多肽使用，但是明确地包括病毒载体例如AAV、载体序列以及多核苷酸和多肽的重组形式。重组腺相关病毒衍生自野生型腺相关病毒，可以通过使用分子方法从病毒序列去除野生型基因，并用非天然核酸例如报告转基因替换。非天然序列例如报告转基因的导入因此将病毒载体定义为“重组”载体，在AAV的情形下，其可以称为“rAAV”。在本文中，术语“重组腺相关病毒”、“重组腺相关病毒载体”、“rAAV”或“重组AAV病毒”之间通常可以互换。

优选地，所述重组腺相关病毒为携带GFP标签的腺相关病毒载体rAVV2，其亦可称为rAVV2-GFP。所述重组腺相关病毒载体还可以衍生自包括AAV1、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、Rh74或Rh10载体，或任何前述AAV腺相关病毒的杂合体或嵌合体。

优选地，将离体血清、所述重组腺相关病毒与哺乳动物细胞共培养36-60小时，优选48小时；所述哺乳动物细胞优选HEK293细胞，更优选293T细胞。