[发明专利]一种液相色谱-串联质谱检测甲氧基肾上腺素类物质的方法

说明书

本发明公开了一种液相色谱‑串联质谱检测甲氧基肾上腺素类物质的方法，包括以下步骤：(1)样本预处理：向待检测样本中加入混合内标溶液进行蛋白沉淀，然后离心取上清液，氮气吹干所述上清液，并用复溶剂复溶，得到复溶液；(2)将步骤(1)获得的复溶液进行纯化；(3)利用液相色谱‑串联质谱法对步骤(2)获得的纯化产物中甲氧基肾上腺素类物质进行测定。本发明方法前处理简单，灵敏度高，特异性强，重现性好，使用在线自动前处理替代部分人工操作，提高了检测效率，减少了出错率，降低了对检测人员的要求，节约了成本，适用于在自动化程度低的临床色谱质谱实验室中推广应用。

技术领域

本发明属于医学检测技术领域，具体涉及一种液相色谱-串联质谱检测甲氧基肾上腺素类物质的方法。

背景技术

嗜铬细胞瘤和副神经节瘤是以儿茶酚胺大量分泌为主要特征的肿瘤。血浆中甲氧基肾上腺素类物质包含甲氧基肾上腺素、甲氧基去甲肾上腺素和3甲氧酪胺，甲氧基肾上腺素类物质一方面来源于儿茶酚胺类激素的代谢，一方面直接来源于嗜铬细胞。血浆中甲氧基肾上腺素类物质的浓度与长期儿茶酚胺水平升高有关，短期儿茶酚胺分泌变化对其影响较小。儿茶酚胺在血中的分泌具有间歇性，受采样时间点等影响，间歇入血容易导致假阳性或假阴性的结果。而血浆甲氧基肾上腺素类物质半衰期较儿茶酚胺激素更长，在体内存在时间更长，因此是重要的标志物。

血浆中甲氧基肾上腺素类物质是美国内分泌协会推荐的诊断嗜铬细胞瘤(PCC)和副神经节瘤(PGL)的首选生物标志物。基于液相色谱-串联质谱法检测该类代谢产物可以更有效、更准确、快速地检出嗜铬细胞瘤和副神经节瘤患者的相关代谢产物水平。目前基于液相色谱-串联质谱对血浆中甲氧基肾上腺素类物质进行检测的方法主要高效液相色谱-电化学检测、离线手工固相萃取-液相色谱-串联质谱检测、离线全自动固相萃取仪-液相色谱-串联质谱以及在线固相萃取-液相色谱-串联质谱。其中，电化学法检测生物样本存在较多干扰，同样也无法对3-甲氧酪胺进行定量分析，部分实验室采用衍生化前处理方法，衍生化过程耗时且毒性较强，而固相萃取技术是现大多数文献报道的且在各临床质谱实验室最常用的样品前处理方法，但该技术仍然存在以下一些问题：1、离线手工固相萃取技术(包含传统固相萃取与简化固相萃取技术)步骤繁多、操作复杂(活化、平衡、上样、淋洗、洗脱)，对于实验室技术人员的各方面要求较高，培训周期较长，容易出现人为导致的结果错误；2、离线全自动固相萃取仪在一定程度上实现了人力的解放，但一般适用于较大体积样本的处理，对于微升级体积样本不适用，且样本处理后，仍需浓缩复溶，较为繁琐；3、离线固相萃取柱活化、平衡、上样、淋洗洗脱体积较大，如需满足反相色谱柱以及低灵敏度质谱仪的要求，前处理过程常常需要进行氮吹浓缩和复溶等步骤，耗时更长，且容易出错；4、目前大多数采用在线固相萃取技术，样本预处理使用超滤管除掉蛋白，而超滤管成本较高，实际应用过程中，采用有机试剂蛋白沉淀仍是临床实验室日常首选方法；5、在线固相萃取技术洗脱采用高比例有机溶剂洗脱，洗脱液直接进入色谱柱分离分析，如使用反相柱则无保留，选用HILIC型色谱柱进行分析时，甲氧基肾上腺素与3-甲氧酪胺因有相同的子离子需实现色谱分离以减少共流出干扰，未分离两化合物易造成3-甲氧酪胺的结果偏高，但文献中未分离两物质。

因此，本领域技术人员迫切需要一种前处理简单、成本相对较低、对人员要求低、检测快速、方法灵敏度高、特异性强的适用于血浆甲氧基肾上腺素类物质的检测方法。

发明内容

基于此，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种液相色谱-串联质谱检测甲氧基肾上腺素类物质的方法，该方法实现了甲氧基肾上腺素类物质的准确定性及定量分析，降低项目实际运营中对人员的要求，减少人员上岗培训的时间，提高了检测方法的分析速度及分析通量，保证了分析方法的灵敏度及重现性。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：一种液相色谱-串联质谱检测甲氧基肾上腺素类物质的方法，包括以下步骤：

(1)样本预处理：向待检测样本中加入混合内标溶液进行蛋白沉淀，然后离心取上清液，氮气吹干所述上清液，并用复溶剂复溶，得到复溶液；