[发明专利]一种普氏原羚粪便中皮质醇激素的提取和检测方法

说明书

本发明公开了一种普氏原羚粪便中皮质醇激素的提取和检测方法。本发明普氏原羚粪便采集和运输的方法如下：观察普氏原羚，发现其排便后用自封袋采集其新鲜粪便，记录相关采集信息，立即放入便携冰箱冷冻保存；然后一次采集粪便完成后转移至‑20℃～‑80℃保存并低温运输。通过提取粪便中的皮质醇激素，然后检测其含量，即能监测普氏原羚生理状态。将普氏原羚的粪便冻干、粉碎，然后采用50～95％甲醇水溶液提取，分离上清液；然后将上清液除去溶剂后用PBS缓冲液复溶，检测得到普氏原羚粪便中皮质醇激素的含量。本发明得到普氏原羚的皮质醇激素水平及变化规律，以对普氏原羚生理状态的监测，同时不影响其正常生理行为，以及对该物种更科学地进行保护的需求。

技术领域

本发明涉及一种普氏原羚粪便中皮质醇激素的提取和检测方法，具体涉及一种普氏原羚粪便采集和运输的方法、一种普氏原羚生理状态监测的方法和一种普氏原羚粪便中皮质醇激素的提取和检测方法，属于野生动物保护领域。

背景技术

采集动物排泄物或分泌物的非损伤取样法(Non-invasive sampling methods)由于不需要对实验动物个体进行捕捉、控制或麻醉，对动物的正常生理行为影响较小，近年来在野生动物生理生态和保护生物学研究中得到了广泛应用。由于野生动物粪便样品相对容易进行连续采集，因此作为最常用的样品为监测野生动物生理状态、评估野生动物受到的胁迫程度提供了有效的手段。普氏原羚(Procapra przewalskii)是我国特有种，一级保护动物，被IUCN红色名录列为濒危物种(EN)(IUCN,2016)，仅分布于青海省青海湖周边的小范围区域。对普氏原羚的研究主要集中在警戒行为、繁殖行为、和保护状况等方面，生理生态方面的研究较为匮乏。

发明内容

本发明的目的是提供一种普氏原羚粪便采集和运输的方法、一种普氏原羚生理状态监测的方法和一种普氏原羚粪便中皮质醇激素的提取和检测方法，本发明通过检测对普氏原羚粪便中皮质醇激素含量，以监测普氏原羚的生理状态，同时不影响其正常生理行为。

本发明提供的一种普氏原羚粪便采集和运输的方法，包括如下步骤：观察普氏原羚，发现其排便后用自封袋采集其新鲜粪便，记录相关采集信息，立即放入便携冰箱冷冻保存；然后一次采集所述粪便完成后转移至-20℃～-80℃保存并低温运输，即得到普氏原羚粪便保存待用。

上述的方法中，所述采集信息包括采集的日期、时间、地点、GPS位点和采样周期；

所述低温的冷媒包括干冰、液氮和冰袋冰板中的至少一种，具体使用便携保温箱提供所述低温环境，所述运输的时间可为0～24h；

所述普氏原羚粪便保存待用的温度可为-20℃～-80℃，时间可为0～2个月，保存待用于进行粪便中皮质醇激素的提取和检测，提取和检测之前保存的条件达到上述条件即可。

本发明中，将得到的所述粪便样品转移至-20℃～-80℃，具体可为转移至超低温冰箱或冰柜冷冻中。

本发明中，所述采样周期是按照实验设计的监测目的来确定的；

采样周期按照监测目的设为每小时一次至每周一次，具体的研究瞬时反应可为每隔2小时采一次，长期效应可为3-5天采一次。

本发明还提供了一种普氏原羚生理状态监测的方法，包括如下步骤：按照上述的普氏原羚粪便采集和运输的方法采集普氏原羚的粪便，通过提取所述粪便中的皮质醇激素，然后检测所述粪便中的皮质醇激素的含量，即能监测普氏原羚生理状态。

本发明中，所述粪便中的皮质醇激素的质量百分含量，由于野生动物所受的内部和外部影响较多，目前没有统一的激素含量范围标准，一般比较不同条件下的变化规律，从而监测普氏原羚生理状态。不同条件下的变化比较，较高的皮质醇激素含量说明动物受到较强的胁迫，处于相对紧张的状态；反之，较低的皮质醇激素说明动物状态比较平和。