[发明专利]用于检测rs662的引物探针组及其应用

说明书

本发明公开了一种用于检测rs662的引物探针组及其应用。本发明首先保护一种引物探针组，由引物F、引物R和探针P组成；引物F为序列表的序列1所示的单链DNA分子；引物R为序列表的序列2所示的单链DNA分子；探针P为一个末端具有荧光基团且另一个末端具有荧光淬灭基团的单链DNA分子，且DNA分子中的部分核苷酸为锁核酸，DNA分子的核苷酸序列为序列表的序列3所示。本发明可用于检测rs662，判断待测样本基于该位点的基因型，从而指导用药，具有重大的应用推广价值。

技术领域

本发明涉及一种用于检测rs662的引物探针组及其应用。

背景技术

对氧磷酶1 ( paraoxonase 1, PON1) 由肝脏合成，含有354个氨基酸，相对分子质量为43，人类定位于 7号染色体长臂q21.3〜q22.1，长约25.9 kb，含9个外显子，8个内含子。P0N1在血清中借助于极端疏水的N端和载脂蛋白A1紧密结合，固定于高密度脂蛋白（high density lipoprotein，HDL)中,因能水解有机磷酸酯的底物对氧磷而命名。研究表明，PON1活性是预测冠心病（coronary artery disease，CAD）危险性的一个独立因素。PON1通过抑制低密度脂蛋白 (low density lipoprotein，LDL)的生成和水解氧化型LDL，抑制巨噬细胞的氧化应激，从而发挥抗动脉粥样硬化作用。研究发现血浆对氧磷酶1活性降低的个体，氯吡格雷的活性代谢产物减弱，血小板抑制作用减少。

氯吡格雷(clopidogrel)是继阿司匹林之后一个重要的噻吩并吡啶类抗血小板药物，也是目前经皮冠状动脉介入治疗（Percutaneous coronary intervention，简称PCI）后的常规用药，但临床应用氯吡格雷时仍有4%～30%的患者在常规剂量治疗中达不到预期的抗血小板作用，严重者会导致血栓、再次心梗死、死亡等心血管不良事件，称为氯吡格雷抵抗(clopidogrel resistance，CR)。基因的多态性是引起氯吡格雷抵抗的重要因素之一。

rs662是位于 PON1基因中的一个SNP，存在两种多态形式，A/G，A为野生型，G为突变型。基于rs662，人群中存在三种基因型，AA/AG/GG。GG纯合型，氯吡格雷活性代谢物水平高，血小板活性被抑制程度高，几乎无氯吡格雷抵抗风险；AG杂合型，半年后出现支架血栓的风险比为4.52，出现心肌梗死的风险比为2.3，氯吡格雷活性代谢物水平中等，血小板活性被中度抑制，有部分氯吡格雷抵抗风险；AA纯合型，半年后出现支架血栓的风险比为12.90，出现心肌梗死的风险比为4.93，氯吡格雷活性代谢物水平低，血小板活性较少被抑制，有氯吡格雷抵抗风险。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测rs662的引物探针组及其应用。

本发明首先保护一种引物探针组，由引物F、引物R和探针P组成；

引物F为如下（a1）或（a2）：

（a1）序列表的序列1所示的单链DNA分子；

（a2）将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；

引物R为如下（b1）或（b2）：

（b1）序列表的序列2所示的单链DNA分子；

（b2）将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；

探针P为一个末端具有荧光基团且另一个末端具有荧光淬灭基团的单链DNA分子，且DNA分子中的部分核苷酸为锁核酸，DNA分子的核苷酸序列为如下（c1）或（c2）：

（c1）序列表的序列3所示；

（c2）将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加。