[发明专利]一株分泌抗左旋咪唑单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

说明书

一株分泌抗左旋咪唑单克隆抗体的杂交瘤细胞株20170506及其应用，属于食品安全免疫检测技术领域。本发明所述分泌抗左旋咪唑单克隆抗体的杂交瘤细胞株20170506，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14702，保藏日期为2017年9月5日；所述菌株可以分泌产生抗左旋咪唑单克隆抗体。该单抗对左旋咪唑具有较好亲和力和较高灵敏度，对左旋咪唑的50%抑制浓度IC₅₀为17.2μg/L，可用于制备左旋咪唑的免疫检测试剂盒以及胶体金试纸条，为动物源性食品中左旋咪唑的检测提供有力的检测方法及手段。

技术领域

本发明涉及一株分泌抗左旋咪唑单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测技术领域。

背景技术

左旋咪唑是一种人工合成的广谱驱肠虫药，应用历史悠久，主要用于驱蛔虫和钩虫，曾经被世界卫生组织和我国卫生部等有关部门认定或推荐为治疗蛔虫病和钩虫病的药物。对多种动物的胃肠道线虫和肺线虫成虫及幼虫均有高效，在兽医临床上用于治疗蛔虫、钩虫、蛲虫、粪圆线虫和丝虫等感染。随着左旋咪唑应用范围的不断扩大，不良反应的报道不断增多，主要表现有消化系统毒副作用、神经系统毒副作用、心血管系统毒副作用、泌尿系统毒副作用等。因此，建立有效的左旋咪唑残留检测方法，对有效控制畜产品中左旋咪唑的残留，促进畜牧养殖业的健康发展，保障广大人民群众的身体健康，具有深远的意义。

目前左旋咪唑检测多采用仪器检测方法，如高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法等。仪器检测方法可进行定量分析并具有较低的检测限，但是通常需要昂贵的仪器和复杂的操作，前处理及检测时间长，严重制约了这些检测方法的推广。而免疫分析方法具有低成本、高通量、高灵敏、对技术人员相对要求低等特点，因此适用于大量样品的快速筛查。

发明内容

本发明的目的在于克服上述不足之处，提供一株分泌抗左旋咪唑单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，由该细胞株制备的单克隆抗体对左旋咪唑具有较好的亲和力和灵敏度，可以用来建立左旋咪唑酶联免疫检测方法，或建立胶体金免疫层析试纸条快速检测方法。

按照本发明提供的技术方案，一株分泌抗左旋咪唑单克隆抗体的杂交瘤细胞株20170506，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.14702，保藏日期为2017年9月5日。

抗左旋咪唑单克隆抗体，其由所述保藏编号为CGMCC No.14702，分泌抗左旋咪唑单克隆抗体的杂交瘤细胞株20170506分泌产生。

所述抗左旋咪唑单克隆抗体的应用，将其应用在食品安全中左旋咪唑残留的检测中。

本发明提供的分泌抗左旋咪唑单克隆抗体的杂交瘤细胞株20170506的制备步骤为：

（1）免疫原的制备与鉴定：以氨基左旋咪唑为原料，通过戊二醛法与蛋白载体的氨基相连，反应结束后，通过透析分离完全抗原和未偶联的小分子半抗原，完全抗原通过紫外吸收扫描方法鉴定；

（2）小鼠的免疫：选取6～8周龄的BALB/c小鼠进行免疫。将免疫原与福氏佐剂乳化完全后，通过皮下多点注射免疫小鼠，首次免疫采用福氏完全佐剂，加强免疫使用福氏不完全佐剂，冲刺免疫时免疫剂量为前一次免疫剂量的一半，与生理盐水混合均匀后直接进行腹腔注射；各次免疫间隔为三周。第三次免疫后，间隔一周采血检测血清效价和抑制；

（3）细胞融合与细胞株建立：通过聚乙二醇（PEG 2000）法，使小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合，通过HAT培养基培养，利用间接ELISA检测阳性细胞孔，并进一步利用间接竞争ELISA法测定阳性细胞孔的抑制效果，通过有限稀释法对有最好抑制的阳性细胞孔进行三次亚克隆，最终筛选获得杂交瘤细胞株20170506；

（4）杂交瘤细胞株20170506性质的鉴定：采用小鼠单抗Ig类/亚类鉴定用酶标二抗套装测定；IC₅₀值、交叉反应率和亲和力的测定通过ELISA法。