[发明专利]人子宫内膜组织来源内皮祖细胞的分离培养方法

说明书

本发明涉及一种人子宫内膜组织来源内皮祖细胞，该子宫内膜组织来源的内皮祖细胞是从人的子宫内膜组织中分离得到。通过酶解法消化人体子宫内膜组织获得单细胞悬液后，采用密度梯度离心法分离得到包含有内皮祖细胞的细胞群，接种于内皮祖细胞培养基中，进行培养及传代纯化，最终获得了新的具有超强血管新生能力的内皮祖细胞。实验证实，这种内皮祖细胞具有自我增殖和克隆样生长能力，具有内皮祖细胞表面标志物，并具有摄取Dil‑ac‑LDL和与FITC‑UEA‑1结合及体外形成管状结构的能力，可应用于制备预防或治疗缺血性疾病的药物。

技术领域

本发明涉及一种新的内皮祖细胞，特别是一种从人体子宫内膜组织中提取的具有强成血管能力的内皮祖细胞。本发明还涉及该子宫内膜内皮祖细胞的分离培养方法。

背景技术

近些年随着人们生活水平、生活习惯的改变，包括心脑血管疾病在内的各种缺血性疾病的患病人数及引发的医疗社会问题呈现持续增长的态势，其发病率高，致死率、致残率高，成为危害人类健康的主要疾病。

所谓缺血性疾病，是一种由于血管狭窄或闭塞导致组织灌注不良，从而造成缺血局部组织细胞供血不足，缺血损伤、坏死，进而对局部乃至全身组织器官的损伤。针对缺血性疾病，现有的治疗手段主要是药物治疗，介入治疗以及外科手术治疗，主要目的是恢复缺血局部的组织供血，并在多数患者中获得了较好的治疗效果，大大改善了缺血性疾病患者的预后。然而这些治疗方法仍然具有各自的局限性，如药物治疗的时间限制，介入治疗的复发，外科手术治疗的风险性等等，使得此类疾病的致死、致残率依然居高不下。因此迫切需要积极探讨针对缺血性疾病，尤其是对传统疗法效果欠佳人群，的新的、更为安全有效的治疗策略，以补充和完善现有治疗手段。

各种缺血性疾病引起组织损伤的根本是局部组织灌注不良，造成缺血局部组织细胞供血不足。促进患者自身缺血局部血管新生，无疑是靶向其发病根本的策略。事实上，正常人体中即存在有血管新生的过程，作为机体对缺血、缺氧损伤的自身代偿性机制。在缺血性疾病的早期，如心肌缺血早期，局部毛细血管密度代偿性增加，在梗阻血管周围形成新生血管，建立新的侧支循环，都是机体应对缺血损伤的自我修复和保护过程。只是在缺血性疾病加重进展的过程中，这种自我修复不足以抗衡损伤，从而导致局部组织细胞缺血乃至坏死。因此，增强血管新生，促使损伤与血管新生修复的天平向修复的方向倾斜，是治疗缺血性疾病的关键。

治疗性血管新生成为治疗缺血性疾病的新理念。各种促进患者血管新生的途径中，干细胞及干细胞移植方面的深入研究为其提供了希望。

干细胞/祖细胞是一种具有自我复制、更新和多向分化潜能的细胞，具有修复受损组织细胞的潜能，近年来已成为疾病治疗和组织工程领域理想的种子细胞，是各种疾病尤其是各种难治性疾病可能的新的有效治疗方法。

根据发育阶段不同，干细胞又分为胚胎干细胞和成体干细胞，其中成体干细胞因其来源广泛，致瘤性相对较低等特点，具有广泛的应用前景。

祖细胞较干细胞具有更明确的定向分化能力，其中内皮祖细胞是血管内皮细胞的前体细胞，能够自我增殖并具有向血管内皮细胞定向分化的能力，在各种生理及病理因素的刺激下，具有非常重要的参与损伤血管修复的作用。研究表明，内皮祖细胞在包括心血管疾病、脑血管疾病、外周血管疾病等多种血管损伤的修复过程中发挥着重要作用，已成为各种缺血性疾病的新的治疗思路。但是，现有内皮祖细胞的来源有限、血管新生能力有限等各方面的问题依然存在。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的具有超强血管新生能力的人子宫内膜组织来源内皮祖细胞。

提供所述人子宫内膜组织来源内皮祖细胞的分离培养方法，是本发明的另一发明目的。

本发明的目的还在于提供所述新的内皮祖细胞的应用。

发明人注意到一种有趣的临床现象：绝经前女性的心血管事件发生率明显低于同年龄段的男性，但女性这种发病率低的优势会在绝经后丧失。这一现象为我们治疗缺血性疾病带来了新的希望。