[发明专利]黄芪多糖用于组织工程皮肤中促进新生皮肤血管网络再生的应用

权利要求书

1.黄芪多糖用于制备促进新生皮肤血管网络再生的组织工程皮肤中应用；所述的组织工程皮肤为负载黄芪多糖/壳聚糖微球的胶原/丝素蛋白支架；组织工程皮肤的制备方法如下：

一、黄芪多糖/壳聚糖微球制备

采用乳化-交联法制备黄芪多糖/壳聚糖微球，具体步骤如下：

(1) 精确称取2 g壳聚糖固体，50℃水浴条件下，加至100 mL 2%的冰乙酸溶液中， 40rpm搅拌，使壳聚糖完全溶解，获得壳聚糖-冰乙酸溶液；

(2) 精确称取1 g黄芪多糖，加至制备好的壳聚糖-乙酸溶液中，搅拌使其完全溶解，然后量取20 mL混合溶液；

(3) 在烧杯中加入90 mL含2 mLSpan-80的液体石蜡作为油相，将壳聚糖混合溶液逐滴加入到油相，50℃水浴条件下，40 rpm搅拌30 min使其乳化并维持20 min；

(4) 待乳化结束后，向溶液中加入2 mL 25%的戊二醛；50℃水浴条件下，40 rpm搅拌3h后，将反应物转移至离心管，静置离心，弃上层液，石油醚洗涤沉淀3次；

(5) 将洗涤好的混合物进行真空抽滤，同时用异丙醇淋洗，预期获得橘黄色固体粉末，即为黄芪多糖/壳聚糖微球；将载药微球取出，放在干净的表面皿上，50℃的恒温烘箱中烘干24 h；

二、负载黄芪多糖/壳聚糖微球的胶原/丝素蛋白支架的制备

采用溶液浇注-冷冻干燥技术，具体制备过程如下：

(1) 将胶原蛋白与丝素蛋白分别溶于一定体积的蒸馏水中，配成3.5%的胶原蛋白水溶液以及1.5%的丝素蛋白水溶液；

(2) 将胶原蛋白水溶液与丝素蛋白水溶液按照溶质蛋白质量比7 : 3混合，再将制备好的黄芪多糖/壳聚糖微球按一定的量加入到混合液中，充分搅拌混匀；

(3) 将含有微球的混合溶液加至事先做好的模具容器内，-20℃预冻成型，然后-60℃真空干燥48 h至72 h，获得的支架为圆柱形，底面半径为0.70 cm，高度为0.50 cm，每个支架含有黄芪多糖/壳聚糖微球0.1 g。