[发明专利]一种确定好氧颗粒污泥最适保存温度的方法

权利要求书

1.一种确定好氧颗粒污泥最适保存温度的方法，其特征在于，所述方法是基于流式细胞术对好氧颗粒污泥的细胞活性状态进行测定，对比不同温度保存的好氧颗粒污泥与保存前好氧颗粒污泥的细胞活性状态的测定结果，以最接近保存前好氧颗粒污泥的细胞活性状态时保存的温度作为最适保存温度；

所述好氧颗粒污泥细胞活性状态测定包括活细胞、凋亡早期细胞、凋亡晚期细胞和死细胞的含量测定；

所述流式细胞术测试步骤包括：(1)制备好氧颗粒污泥测试样液，(2)利用流式细胞仪测定各样液的细胞活性状态；

所述好氧颗粒污泥测试样液是用磷酸盐缓冲液稀释、震荡均匀后，过滤、离心，留用上清液，使用预冷磷酸盐缓冲液吹洗细胞，重复离心和清洗两次，再取上清液作为样品，使用适量10x Annexin V Binding Buffer混匀制得；

所述流式细胞仪测定各样液的细胞活性状态是在对照FITC Annexin V组加入0.5μlPI染色剂，对照PI组加入0.5μl FITC Annexin V，检测组加入0.5μl FITC Annexin V和0.5μl PI，混匀后室温下避光孵育，之后于流式细胞仪上机检测。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述最适保存温度保存的好氧颗粒污泥活细胞含量不低于保存前的73.6％。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述最适保存温度保存的好氧颗粒污泥凋亡晚期细胞和死细胞总含量不超过保存前的3.5倍。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲液的pH为7.0～8.0。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述好氧颗粒污泥混合物与磷酸盐缓冲液的稀释体积比为1：8～10。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述上清液样品与10x Annexin V BindingBuffer的混合体积比例为1：2～4。

7.权利要求1所述方法在确认好氧颗粒污泥最适保存温度中的应用。