[发明专利]鉴别药典中3种药用石斛的荧光PCR检测试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种鉴别药典中3种药用石斛的荧光PCR检测试剂盒及应用。该检测试剂盒包括金钗石斛、鼓槌石斛和流苏石斛的特异引物和特异探针，以及石斛属通用引物和通用探针，其序列如SEQ No.1‑12所示。本发明以特异性荧光探针与模板配对，具有高度的特异性与专一性，并且扩增效率高，灵敏度高，准确率高，重现性好，检测周期短，能在1.5小时内完成检测，且能实时检测DNA扩增反应，为2015版药典中记载的3种药用石斛的品质和真实性提供有力的保障。

技术领域

本发明涉及一种检测方法，具体涉及一种鉴别药典中3种药用石斛的荧光PCR检测试剂盒及应用，属于分子生物学技术领域。

背景技术

石斛为兰科石斛属多年生草本植物，主要分布在热带及亚热带地区，全球约有1500种。在我国大约有76种，多分布在北纬30度以南地区。该属植物中的一些种类是常用的中药材，具有益胃生津、滋阴清热的功效，既可以用来泡茶、泡酒、作药膳等，也可直接食用、观赏，价值较高。

由于石斛属种类繁杂、分布广，分类混乱，不同种类的石斛药材，外观相似，但药效存有差异。目前常用的鉴定方法有组织鉴定、显微鉴定、光谱鉴定、色谱鉴定、分子生物学技术鉴定等，但是这些方法会存在感官检测局限性、准确性低、仪器配套成本高、鉴别操作复杂等问题。近年来实时荧光PCR技术检测的灵敏度、特异性和准确性，受到了很多研究领域的一致认可。本发明将该技术应用于2015版药典中的3种药用的石斛：金钗石斛(Dendrobium nobile Lindl.)、鼓槌石斛(Dendrobium chrysotoxum Lindl.)和流苏石斛(Dendrobium fimbriatum Hook.)的鉴定中，对石斛类药材及其基源植物的鉴定起到重要作用。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种在一个PCR反应中可同时鉴别金钗石斛、鼓槌石斛和流苏石斛的荧光PCR检测试剂盒及应用。本发明的试剂盒具有高度的特异性与专一性，并且扩增效率高，灵敏度高，准确率高，重现性好，检测周期短，且能实时检测DNA扩增反应，具有很高的可行性与应用前景。

本发明的技术方案是：一种鉴别药典中3种药用石斛的荧光PCR检测试剂盒，其特征是，它包括金钗石斛、鼓槌石斛和流苏石斛的特异引物和特异探针，以及石斛属通用引物和通用探针，其中：

金钗石斛(JC)特异上游引物JCF：5’-AGAGACGAACACAATGAGCGA-3’(SEQ No.1)；

金钗石斛(JC)特异下游引物JCR：5’-CACCCAATCCCACAAAACC-3’(SEQ No.2)；

金钗石斛(JC)特异探针JCP：FAM-CGGTGCCTGTAGTGCTGCGAT-BHQ2(SEQ No.3)；

鼓槌石斛(GC)特异上游引物GCF：5’-GCAGCGAAATGCGATACG-3’(SEQ No.4)；

鼓槌石斛(GC)特异下游引物GCR：5’-GGCACGAGGAGCCACTGT-3’(SEQ No.5)；

鼓槌石斛(GC)特异探针GCP：CY5-ATCGACGGGTGGCTGGACAC-BHQ1(SEQ No.6)；

流苏石斛(LS)特异上游引物LSF：5’-TGTTATTGTGTCGTGTATGCCC-3’(SEQ No.7)；

流苏石斛(LS)特异下游引物LSR：5’-TCCTCGTAAGTTTCTTCTCCTCC-3’(SEQ No.8)；

流苏石斛(LS)特异探针LSP：NED-CAGGTGATCCTGAATCATGCGTC-BHQ1(SEQ No.9)；

石斛属(USH)通用上游引物USHF：5’-ACGATGGATATCTCGGCTC-3’(SEQ No.10)；