[发明专利]一种分泌噻虫嗪单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

权利要求书

1.一种分泌噻虫嗪单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株已于2017年9月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.14699，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

2.如权利要求1所述的一种分泌噻虫嗪单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：

步骤1：制备噻虫嗪半抗原及噻虫嗪完全抗原，将获得的噻虫嗪完全抗原制备成弗氏佐剂与不完全弗氏佐剂；

步骤2：将得到的弗氏佐剂通过背部皮下注射，注射进入BALB/c小鼠体内进行多次免疫，首次免疫采用完全弗氏佐剂，加强免疫采用不完全弗氏佐剂；

步骤3：将经过上述免疫过程的小鼠进行采血，通过间接ELISA检测小鼠血清免疫效价和免疫抑制能力，删选出血清中噻虫嗪抗体含量高的获得免疫的小鼠；

步骤4：将删选出的小鼠用不完全弗氏佐剂再进行最后一次加强免疫，然后通过腹腔注射进行冲击免疫，冲击免疫采用不含弗氏佐剂的噻虫嗪完全抗原进行；

步骤5：将进行冲击免疫后的BALB/c小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞融合，将融合的细胞通过HAT培养基培养，利用间接ELISA检测阳性细胞孔，并进一步利用间接竞争ELISA法测定阳性细胞孔的抑制效果，通过有限稀释法对有最好抑制的阳性细胞孔进行亚克隆，最终筛选出获得能分泌噻虫嗪单克隆抗体的杂交瘤细胞株；

所述步骤1中的噻虫嗪半抗原的分子式如下：

所述步骤1中的噻虫嗪完全抗原的分子式如下：

3.权利要求1所述的一种分泌噻虫嗪单克隆抗体的杂交瘤细胞株或权利要求2所述的一种分泌噻虫嗪单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法在制备噻虫嗪单克隆抗体方面的应用。

4.一种噻虫嗪完全抗原，其特征在于，所述噻虫嗪完全抗原的分子式如下：

5.如权利要求4所述的一种噻虫嗪完全抗原的制备方法，其特征在于，所述方法为将噻虫嗪半抗原(TMX-COOH)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，搅拌进行反应，得到噻虫嗪半抗原(TMX-COOH)溶液；将N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC)溶解于无水DMF后，加入到TMX-COOH溶液中，搅拌进行反应，得到A液；将钥孔血蓝蛋白(KLH)用磷酸盐缓冲溶液(PBS)稀释，得到B液；将A液加入到B液中进行反应，得到反应液；用PBS溶液透析反应液，得到完全抗原(TMX-COOH-KLH)。

6.权利要求4所述的一种噻虫嗪完全抗原或权利要求5所述的一种噻虫嗪完全抗原的制备方法在制备分泌噻虫嗪单克隆抗体的杂交瘤细胞株、噻虫嗪单克隆抗体方面的应用。

7.一种噻虫嗪单克隆抗体，其特征在于，所述噻虫嗪单克隆抗体是由保藏编号为CGMCCNo.14699的杂交瘤细胞株分泌获得的。

8.如权利要求7所述的一种噻虫嗪单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述方法为取BALB/c小鼠，腹腔注射石蜡油，再腹腔注射保藏编号为CGMCC No.14699的杂交瘤细胞株，注射后收集腹水，将腹水纯化，将获得的单抗低温保存。

9.权利要求7所述的一种噻虫嗪单克隆抗体或权利要求8所述的一种噻虫嗪单克隆抗体的制备方法在识别噻虫嗪方面的应用。

10.应用权利要求1所述的一种分泌噻虫嗪单克隆抗体的杂交瘤细胞株或权利要求4所述的一种噻虫嗪完全抗原或权利要求7所述的一种噻虫嗪单克隆抗体制备得到的检测试剂盒。