[发明专利]外周血单个核细胞诱导的记忆性免疫细胞及应用

权利要求书

1.一种外周血单个核细胞诱导的记忆性免疫细胞，其特征在于将新鲜分离的或者经过冻存后复苏的外周血单个核细胞经过筛选和二次阳性分选出记忆性免疫细胞，诱导后即得。

2.根据权利要求1所述的记忆性免疫细胞，其特征在于诱导分化操作如下：

（1）记忆性免疫细胞分离后重悬，加入300-2000u/mLIFN-γ、抗人50-200ng/mL CD3单克隆抗体、50-200ng/mL CD28单克隆抗体及500-2000u/mL重组人IL-2和50-200u/mLIL-1α完成初次刺激；

（2）每2天半量换液，补加500-2000u/mL重组人IL-2、500-1000 u/mL IL-7 和500-1000u/mL重组人IL-15，培养时间为12-20天。

3.根据权利要求2所述的记忆性免疫细胞，其特征在于诱导后使用重组TCR逆转录病毒转染。

4.根据权利要求2所述的记忆性免疫细胞，其特征在于步骤（1）中将记忆性免疫细胞用X-VIVO15重悬。

5.根据权利要求2所述的记忆性免疫细胞，其特征在于步骤（1）中重悬的浓度为(0.4-1.2)×10⁶/mL。

6.根据权利要求2所述的记忆性免疫细胞，其特征在于步骤（1）中外周血TCM细胞重悬后，加入500-1000u/mLIFN-γ、抗人90-200ng/mL CD3单克隆抗体、90-200ng/mL CD28单克隆抗体及500-1000u/mL重组人IL-2和90-200u/mLIL-1α完成初次刺激。

7.根据权利要求2所述的记忆性免疫细胞，其特征在于步骤（2）中补加500-1000u/mL重组人IL-2、500-1000 u/mL IL-7 和500-1000 u/mL重组人IL-15。

8.根据权利要求2所述的记忆性免疫细胞，其特征在于

（1）外周血单个核细胞重悬后，以1000IU/ml IFN-γ、抗人130ng/ml CD3单克隆抗体、抗人110ng/ml CD28单克隆抗体及重组人1000IU/ml IL-2、120u/mLIL-1α完成初次刺激；

（2）每2天半量换液，补加1000IU/ml重组人IL-2 、800 u/mL IL-7和800 u/mLIL-15。

9.一种权利要求1-8中任一项所述的记忆性免疫细胞在临床肿瘤治疗和病毒感染性疾病药物中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于所述肿瘤包括但不限于肾癌、恶性黑色素瘤、肺癌、肝癌、大肠癌、胃癌或淋巴瘤和病毒感染性疾病包括但不限病毒性肝炎、结核病和艾滋病等。