[发明专利]一种基于双功能纳米颗粒的免疫学检测方法

说明书

本发明公开了一种基于双功能纳米颗粒的免疫学检测方法，所述双功能纳米颗粒上包被有催化底物显色的酶或者信号分子，还包被有与检测抗体或者抗原发生特异性结合的分子。该方法通过纳米颗粒对检测信号进行放大，实现高灵敏检测。该方法可以将检测灵敏性提高一到两个数量级。

技术领域

本发明涉及一种免疫学检测方法，具体涉及一种基于双功能纳米颗粒的免疫学检测方法。

背景技术

ELISA是一种常用的检测方法，该方法灵敏度高、简便、成本低、易于操作，因而广泛应用于临床检测、食品安全检测、环境监测等诸多领域，成为免疫学检测领域中一种最为常用的检测方法。但是在某些需要高灵敏检测领域，ELISA则难以施展拳脚。因而，提高ELISA的灵敏性是免疫学检测方法研究的一个热点。比如，化学发光免疫学检测（chemiluminescent enzyme immunoassay，CLEIA）、时间分辨荧光时间分辨荧光免疫检测（time-resolved fluoroimmunoassay，TRFIA）是两种最为成功的高灵敏检测系统。这两种检测方法已经广泛应用于临床检测，展示出强大的生命力。

随着科技的发展，纳米科技在生物医药领域的应用也越来越广泛。其中，纳米颗粒以其优良的理化属性在生物学在诊断领域得到广泛应用，但是现有采用纳米颗粒实现信号放大的检测方法的灵敏度还有待提高。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种基于双功能纳米颗粒的免疫学检测方法，其利用了纳米颗粒极大的比表面积，每个被夹心的抗原对应着更多的信号分子（酶、荧光基团等），因而可以大幅提高检测信号强度，进而提高检测的灵敏性。

本发明所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：

一种基于双功能纳米颗粒的免疫学检测方法，该双功能纳米颗粒上包被有催化底物显色的酶或者信号分子，纳米颗粒上还有与检测抗体或者抗原发生特异性结合的分子。

如上所述的免疫学检测方法中，所述免疫学检测方法为酶联免疫吸附试验、化学发光免疫检测分析、时间分辨免疫检测分析中的一种。

如上所述的免疫学检测方法中，所述酶为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶中的一种。

如上所述的免疫学检测方法中，所述双功能纳米颗粒上包被有辣根过氧化物酶和抗生物素抗体。

如上所述的免疫学检测方法中，所述双功能纳米颗粒上包被有链霉亲和素和辣根过氧化物酶。

如上所述的免疫学检测方法中，所述双功能纳米颗粒的粒径为10nm～100nm。

如上所述的免疫学检测方法中，所述双功能纳米颗粒重悬于含有葡聚糖的重悬液中。进一步低，所述重悬液中的葡聚糖含量不小于5%。更进一步地，所述葡聚糖的分子量不大于10000。更进一步地，所述葡聚糖为α-葡聚糖或β-葡聚糖中的一种，或者两者的混合物。

本发明具有如下有益效果：本发明利用了纳米颗粒极大的比表面积，每个被夹心的抗原对应着更多的信号分子（酶、荧光基团等），因而可以大幅提高检测信号强度，进而提高检测的灵敏性。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进行详细的说明，实施例仅是本发明的优选实施方式，不是对本发明的限定。

实施例1 检测艾滋病毒P24蛋白

实验设计：取1份阴性血清样本和1份阳性血清样本，用阴性血清将上述两份样本梯度稀释，采用实验方法和对照方法检测梯度稀释的样本，比较两种方法检测灵敏性差异。

A.实验方法：