[发明专利]降解重金属富集植株的微生物组合及降解方法

权利要求书

1. 降解重金属富集植株的微生物组合，其特征在于：所述微生物组合为枯草芽孢杆菌(B. subtilis)-白腐菌(P. chrysosporium)-里氏木霉(T. ressei)-强启动菌株QD-1(Pterula sp. strain QD-1)，其中枯草芽孢杆菌: 白腐菌:里氏木霉:强启动菌株=0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5。

2.根据权利要求1所述的降解重金属富集植株的微生物组合，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌: 白腐菌:里氏木霉:强启动菌株=0.8-1.2:0.8-1.2:0.8-1.2:0.8-1.2。

3.根据权利要求1所述的降解重金属富集植株的微生物组合，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌: 白腐菌:里氏木霉:强启动菌株=1:1:1:1。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的降解重金属富集植株的微生物组合，其特征在于：所述微生物组合菌浓度为OD₆₀₀₌ 0.8，pH7.0；所述植物为黑麦草、水稻秸秆、木屑和滤纸。

5.根据权利要求1所述的降解重金属富集植株的微生物组合，其特征在于：所述白腐菌、里氏木霉和强启动菌株三种菌分开用PDA培养基培养，所述细菌由细菌培养基培养；放置于37 ℃恒温摇床中150rpm培养48h，然后分开取菌液进行复配；所述微生物组合用匀浆机将菌球打散，并再以无菌PDA培养基调节菌浓度。

6.根据权利要求5所述的降解重金属富集植株的微生物组合，其特征在于：所述PDA培养基：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂0 g或20 g，蒸馏水1 L；培养基pH为6.8-7.2，优化方案中pH为7；所述细菌培养基为LB培养基：酵母粉5 g，蛋白胨10 g，NaCl 10 g，琼脂０g或20g，蒸馏水1 L ，pH 7.2-7.4。

7.根据权利要求1所述的降解重金属富集植株的微生物组合，其特征在于：所述菌种有驯化的过程，包括以下步骤：

（1）菌悬液的制备：将已经培养了的菌株制成对数期种子液准备诱变；

（2）紫外线诱变：实验前将超净工作台周围遮光，使光波被紫外灯照射后处于稳定状态，在空平皿中加入4 mL培养到20 h的菌液并将其在距离紫外灯24 cm的位置给予50 min的照射，每隔一段时间对平皿进行转动；

（3）在无菌环境中将诱变处理完毕的孢子悬液梯度稀释到10-4、10-5、10-6于分别含20、50、100mg U的刚果红筛选培养基平板上涂布，在恒温的条件下对被牛皮纸和黑塑料袋处理好的菌液做好记号后进行培养，筛选出的菌株为优势菌株。

8.根据权利要求1所述的一种降解重金属富集植株的降解方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）重金属富集植物蒸汽灭菌；

（2）添加无菌尿素溶液，同时添加接种量为10%的微生物组合的菌悬液；

（3）降解，时间30天。

9.根据权利要求7所述的一种降解重金属富集植株的降解方法，其特征在于：

所述降解过程中，温度25-40℃，初始pH值6-7.5，富集植物截段长度1-2.5 cm，初始含水量40-70%，尿素添加量1-2.5 g/kg；优化方案中温度40℃，初始pH值7.5，富集植物截段长度1.5 cm，初始含水量70%，尿素添加量2.5 g/kg。

10.根据权利要求6所述的一种降解重金属富集植株的降解方法，其特征在于：所述降解过程在中试降解池中反应，中试降解池包括设有降解池、通气管道、空气泵、挡板和通风口，降解池内为中空，挡板设在降解池内并靠近降解池底面；通风管道固定于挡板一侧面，通风口设于降解池顶端并靠近挡板侧；空气泵设于降解池外，通气管道穿过通风口与空气泵连接；优化方案中所述中试降解池长、宽、高分别为480 mm、475 mm、225 mm；其容积为53.956 dm³；进一步优化方案中所述挡板上还铺设有一层孔径边长为1 mm的网格条，以防止实验材料从通风口进入底部预留空间；优化方案中所述挡板离降解池底面15 mm处，预留空间占降解池总体积的6.3%。