[发明专利]一种新型葡糖淀粉酶及其基因与应用

权利要求书

1.一种葡糖淀粉酶，其特征在于，所述葡糖淀粉酶，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.17所示。

2.包含权利要求1所述葡糖淀粉酶的重组菌株。

3.如权利要求2所述的重组菌株，其特征在于，表达宿主菌是米根霉、酿酒酵母、毕赤酵母、地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、解淀粉芽胞杆菌、凝结芽胞杆菌、大肠杆菌或谷氨酸棒杆菌。

4.如权利要求3所述的重组菌株，其特征在于，所述重组菌的表达宿主为毕赤酵母GS115，表达载体为质粒pPIC9K。

5.权利要求1所述葡糖淀粉酶的发酵制备方法，其特征在于，具体如下：

（1）接种：按照2-15%接种量接种包含所述葡糖淀粉酶的重组菌株，发酵培养基中添加微量元素后开始发酵，发酵温度为28-40℃，pH维持4.0-8.0，DO维持20%以上；

（2）菌体生长阶段：菌体生长约10-28 h后，DO快速上升，随即进入补料生长阶段；

（3））补料生长阶段：流加10-60%甘油，初始流加速度为1.0-8.0 mL/min，当DO低于20%时停止流加；待甘油再次耗尽，DO快速上升后，使菌体保持饥饿状态0.5-3.0 h，然后进入诱导产酶阶段；

（4）诱导产酶阶段：流加甲醇；初始流加速率为1.0-4.5 mL/min；当DO低于20%时停止流加；待甲醇耗尽，DO快速上升后，重新开始流加，流加速率提高至2.5-8.0 mL/min；1-5 h后流加甲醇速率提高至5.0-15.5 mL/min，诱导70-120 h后发酵结束。

6.权利要求5所述葡糖淀粉酶的发酵制备方法，其特征在于，发酵培养基组成为：85%磷酸26.70 mL/L，CaSO₄·2H₂O1.18g/L，K₂SO₄18.20 g/L，MgSO₄7.27 g/L，KOH4.13 g/L，甘油10.00-50.00 g/L，其余为水。

7.权利要求1所述葡糖淀粉酶在10~300 m³发酵体系下以淀粉液化液为原料和同步糖化并被聚合级D-乳酸或聚合级L-乳酸生产菌种代谢利用制备乳酸单体中的应用。

8.权利要求2所述重组菌株在生产权利要求1所述葡糖淀粉酶中的应用。