[发明专利]CRISPR酶以及系统

权利要求书

1.一种工程化的、非天然存在的系统，包含

a)Cpf1效应蛋白，以及

b)至少一种被设计为与所述Cpf1效应蛋白形成复合物且包含指导序列的工程化的指导多核苷酸，其中所述指导序列被设计为与真核细胞中的靶序列杂交，其中所述靶序列是原型间隔区相邻基序(PAM)的3’且所述PAM包含5’T-富集基序；以及

其中所述系统缺乏tracr序列，所述工程化的指导多核苷酸和Cpf1效应蛋白不是天然存在在一起的，且所述工程化的指导多核苷酸与Cpf1效应蛋白的复合物不是天然存在的。

2.一种工程化的、非天然存在的系统，包含

a)一种或多种编码Cpf1效应蛋白的核苷酸序列，以及

b)一种或多种编码至少一种工程化的指导多核苷酸的核苷酸序列，所述至少一种工程化的指导多核苷酸被设计为与所述Cpf1效应蛋白形成复合物且包含指导序列，其中所述指导序列被设计为与真核细胞中的靶序列杂交，其中所述靶序列是原型间隔区相邻基序(PAM)的3’且所述PAM包含5’T-富集基序；以及

其中所述系统缺乏tracr序列，所述工程化的指导多核苷酸和Cpf1效应蛋白不是天然存在在一起的，且所述工程化的指导多核苷酸与Cpf1效应蛋白的复合物不是天然存在的。

3.一种包含一种或多种载体的工程化的、非天然存在的载体系统，包含

a)可操作地连接至一种或多种编码Cpf1效应蛋白的核苷酸序列的第一调节元件；

b)可操作地连接至一种或多种编码至少一种工程化的指导多核苷酸的核苷酸序列的第二调节元件，所述至少一种工程化的指导多核苷酸被设计为与所述Cpf1效应蛋白形成复合物且包含指导序列，其中所述指导序列被设计为与真核细胞中的靶序列杂交，其中所述靶序列是原型间隔区相邻基序(PAM)的3’且所述PAM包含5’T-富集基序；以及

其中所述系统缺乏tracr序列，组分(a)和(b)位于所述系统的相同或不同的载体上，所述工程化的指导多核苷酸和Cpf1效应蛋白不是天然存在在一起的，且所述工程化的指导多核苷酸与Cpf1效应蛋白的复合物不是天然存在的。

4.一种工程化的、非天然存在的系统，包含

a)Cpf1效应蛋白，或一种或多种编码所述Cpf1效应蛋白的核苷酸序列，以及

b)至少一种被设计为与所述Cpf1效应蛋白形成复合物且包含指导序列的工程化的指导多核苷酸，其中所述指导序列被设计为与真核细胞中的靶序列杂交，或一种或多种编码所述至少一种工程化的指导多核苷酸的核苷酸序列，其中所述靶序列是原型间隔区相邻基序(PAM)的3’且所述PAM包含5’T-富集基序；

其中所述系统缺乏tracr序列，所述工程化的指导多核苷酸和Cpf1效应蛋白不是天然存在在一起的，且所述工程化的指导多核苷酸与Cpf1效应蛋白的复合物不是天然存在的。

5.如权利要求4所述的系统，包含所述至少一种工程化的指导多核苷酸。

6.如权利要求4所述的系统，包含所述一种或多种编码所述Cpf1效应蛋白的核苷酸序列。

7.如权利要求4所述的系统，包含所述Cpf1效应蛋白。

8.如权利要求4所述的系统，包含所述一种或多种编码所述至少一种工程化的指导多核苷酸的核苷酸序列。

9.如权利要求1、2、3或4所述的系统，其中所述至少一种工程化的指导多核苷酸与所述Cpf1效应蛋白的复合物引起所述靶序列远端切割。

10.如权利要9所述的系统，其中所述切割生成具有4或5-nt 5’突出端的交错双链断裂。

11.如权利要求1、2、3或4所述的系统，其中所述Cpf1效应蛋白来源于图64A或64B所列出的细菌种类。