[发明专利]适用于猫犬间充质干细胞的低致敏性保存液及其制备方法

说明书

本发明提供了一种适用于猫犬间充质干细胞常温运输的低致敏性保存液，其包括蒸馏水，以及羟乙基淀粉130/0.4、葡萄糖、柠檬酸、柠檬酸钠和氯化钠。本发明的适用于猫犬间充质干细胞常温运输的低致敏性保存液在常温下可较长时间、远距离运输间充质干细胞，能保证细胞活力和稳定性且可以直接输注入体内不引起过敏反应。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种适用于猫犬间充质干细胞的低致敏性保存液及其制备方法。

背景技术

间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells，MSC)是由中胚层发育而来的成体干细胞，其最先于骨髓当中分离得到，随后发现其存在于机体各个组织中，如脂肪、内脏、肌肉等及胎盘、羊膜、脐带等产后废弃组织。其具有自我更新和多向分化的能力，能在体内或体外诱导分化成脂肪、骨、软骨、神经等细胞。近年来，随着干细胞治疗的兴起，MSC被应用于血液疾病、皮肤创伤、肝肾损伤、关节炎、心肌炎和癌症等疾病的治疗，取得了令人满意的效果。

MSC的运输是影响其临床推广与应用的重要因素，也是人们一直想要攻破的难题。常规的MSC运输包括超低温冻存运输和常温贴壁运输，超低温冻存运输成本高且对细胞损伤较大，冻存液中含有血清和DMSO等成分，解冻后不能直接输注到体内；常温贴壁运输方法维持细胞活性时间短，并且后续操作步骤繁多，不利于大范围临床推广。另外，如果进行简单的细胞输注前处理，则不能保证细胞的稳定性和长时间保存的活性，并且细胞运输过程中容易成团，常规吹打不能使其分开，影响后期治疗效果。

发明内容

本发明的目的是针对以上要解决的技术问题，提供一种在常温下可较长时间、远距离运输间充质干细胞且能保证细胞活力和稳定性的保存液，该保存液可直接输注入体内，并不引起过敏反应。

为此，本发明提供了以下技术方案。

一种适用于猫犬间充质干细胞的低致敏性保存液，其包括蒸馏水，以及基于所述蒸馏水的重量计为1.5～4.5％的羟乙基淀粉130/0.4、0.5～1.5％的葡萄糖、0.014～0.042％的柠檬酸、0.2～0.6％的柠檬酸钠和0.9％的氯化钠。

本发明还提供了所述适用于猫犬间充质干细胞的低致敏性保存液的制备方法，包括：

按量称取羟乙基淀粉、葡萄糖、柠檬酸、柠檬酸钠、氯化钠并加入蒸馏水，溶解后高压灭菌，即得所述低致敏性保存液。

本文所称“高压灭菌”指在密闭的高压蒸汽灭菌器内，利用压力大于常压的饱和水蒸汽来杀灭微生物，特别是在压力102.97～137.30kPa、温度121～126℃时进行蒸汽灭菌15～30分钟。

本发明还提供了一种保存猫犬间充质干细胞的方法，其包括：

将待保存的猫犬间充质干细胞加入所述适用于猫犬间充质干细胞的低致敏性保存液中。

优选地，用所述低致敏性保存液将猫犬间充质干细胞密度调整至1×10⁶～5×10⁶/ml。

利用本发明的适用于猫犬间充质干细胞的低致敏性保存液储存猫犬间充质干细胞，可以较远距离运输间充质干细胞并保证细胞的活力和稳定性，且配方中所有成分安全无毒，临床上可直接输注到体内，辅助治疗。此外，该保存液对以往人们常用的高蛋白成分进行改良，使得临床直接输注干细胞及储存液的致敏性大大降低，安全无毒副作用。

附图说明

图1示出了P3代犬脂肪间充质干细胞贴壁状态。

图2示出了P3代猫脂肪间充质干细胞贴壁状态。

图3是犬脂肪间充质干细胞接种至培养板6h后的细胞贴壁情况。

图4是猫脂肪间充质干细胞接种至培养板6h后的细胞贴壁情况。