[发明专利]生物核酸DNA快速释放提取试剂以及制备方法和应用

说明书

一种生物核酸DNA快速释放提取试剂，由A溶液和B溶液组成，A溶液和B溶液按常规制剂方法制成。A溶液由莎梵婷或OrfamideA、十二烷基硫酸钠、二甲基亚砜、聚乙二醇对异辛基苯基醚、乙醇或甲醇、无菌水按常规制剂方法制成；B溶液由氯化钾、三羟甲基氨基甲烷、氯化镁、盐酸、无菌水按常规制剂方法制成。使用时将A溶液和B溶液混合。该提取试剂可用于下游PCR反应以及在实时荧光定量PCR检测中应用。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及到生物核酸DNA快速释放提取试剂以及制备方法和应用。

背景技术

聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，稳定的Taq DNA聚合酶的发现为PCR技术的发展奠定了基础。由于Taq DNA聚合酶活性条件限制，PCR技术要求使用纯净的核酸提取样本。目前，常用的生物核酸释放提取方法包括：碱裂解法、酚抽提法、硅胶膜离心柱、磁珠法等。其中，碱裂解法通常采用具有腐蚀性的氢氧化钠变性后再用酸中和沉淀；酚抽提法步骤复杂，采用苯酚、氯仿等有机溶剂抽提，化学毒性大；硅胶膜离心柱，采用高分子树脂膜截留纯化DNA，全过程须多次高速离心换管，耗时较长；磁珠法采用磁珠吸附，溶剂洗脱的方法提取DNA，操作过程需要使用磁套和磁体吸附，限制了操作通量，通常需要借助全自动磁珠提取仪来完成。这些生物DNA提取方法，如果手工操作，则耗时较长、操作过程复杂，对操作人员要求高，不利于技术推广或日常研究应用；如果仪器操作，则需要使用价格昂贵、精密度高的大型设备，且需要耗费大量一次性耗材，小规模实验室无法负担。目前，商用生物核酸DNA释放提取试剂盒一般采用硅胶膜离心柱和磁珠法，操作过程复杂，需多次开管、洗涤、分离，要求操作人员熟练地掌握工艺流程以及仪器的操作过程，容易造成PCR检测环境核酸污染，导致实验结果的不确定性，全过程须多次高速离心换管，耗时较长，不利于技术推广或日常研究应用。

发明内容

本发明所要解决的一个技术问题在于克服上述现有生物核酸DNA提取试剂盒的缺陷，提供一种高效的生物核酸DNA快速释放提取试剂。

本发明所要解决的另一个技术问题在于提供一种生物核酸DNA快速释放提取试剂的制备方法。

本发明所要解决的还有一个技术问题在于为生物核酸DNA快速释放提取试剂提供一种新用途。

解决上述技术问题所采用的技术方案是由A溶液和B溶液组成；

A溶液由莎梵婷或OrfamideA、十二烷基硫酸钠、二甲基亚砜、聚乙二醇对异辛基苯基醚、乙醇或甲醇、无菌水制成，在A溶液中，莎梵婷或OrfamideA的摩尔浓度为0.01～1mmol/L，十二烷基硫酸钠的质量浓度为0.347～70mmol/L，二甲基亚砜的体积浓度为0.01％～2％，聚乙二醇对异辛基苯基醚的体积浓度为0.1％～2％，乙醇或甲醇的体积浓度为0.01％～1％。

B溶液由氯化钾、三羟甲基氨基甲烷、氯化镁、盐酸、无菌水制成，在B溶液中，氯化钾的摩尔浓度为10～500mmol/L，三羟甲基氨基甲烷的摩尔浓度为1～10mmol/L，氯化镁摩尔浓度为0.01～10mmol/L，盐酸用于调节PH值至8.0～8.5。

本发明的A溶液中的十二烷基硫酸钠与B液中氯化钾摩尔浓度的比为1：7.14～1153。

上述的生物核酸DNA快速释放提取试剂的制备方法由下述步骤组成：

(1)配制A溶液

将莎梵婷或OrfamideA用乙醇或甲醇充分溶解，加入无菌水，再加入十二烷基硫酸钠、二甲基亚砜、聚乙二醇对异辛基苯基醚，搅拌溶解，制备成A溶液，在A溶液中，莎梵婷或OrfamideA的摩尔浓度为0.01～1mmol/L，乙醇或甲醇的体积浓度为0.01～1％，十二烷基硫酸钠的质量浓度为0.347～70mmol/、二甲基亚砜的体积浓度为0.01％～2％，聚乙二醇对异辛基苯基醚的体积浓度为0.1％～2％。

(2)配制B溶液