[发明专利]一种检测循环肿瘤细胞HER2、ER、PR的免疫荧光试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种检测循环肿瘤细胞HER2、ER、PR的免疫荧光试剂盒及其应用，本发明所述方法，检测原理如下：首先富集循环肿瘤细胞和其他稀有细胞，然后根据抗原抗体反应原理，采用免疫荧光检测方法，检测富集的细胞中目的蛋白在细胞中的表达。本试剂盒通过对靶标细胞和白细胞共同抗原CD45进行荧光标记，通过筛选目的蛋白阳性、CD45阴性的细胞，从而对血液中特定蛋白阳性的循环肿瘤细胞进行判读和计数。

技术领域：

本发明涉及一种医用检测方法，特别涉及血液中循环肿瘤细胞的检测，具体涉及人表皮生长因子受体2(HER2)、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)蛋白免疫荧光检测试剂盒，适用于不同体液样本HER2、ER、PR抗原检测，还涉及该试剂盒在检测HER2、ER、PR中的用途。

背景技术：

目前癌症发病率较高，严重威胁人类健康。有些癌症较难早期发现，诊断时多为晚期，如肺癌，结直肠癌，卵巢癌，胰腺癌等。相应的，晚期癌症的5年存活率显著低于早期患者，早发现早诊断精准治疗可显著延长患者的存活时间。

人表皮生长因子受体2(Human epidermal growth factor receptor 2，HER2)、雌激素受体(Estrogen receptor，ER)、孕激素受体(Progesterone receptor，PR)是重要的免疫组化标志物之一。在包括乳腺癌、胃癌、肠癌、肺癌、子宫内膜癌等的其他多种恶性肿瘤中可检测到HER2蛋白的过表达。在包括乳腺癌、子宫内膜癌中也常有ER、PR的高表达。临床常根据HER2、ER、PR的表达状态为患者的临床治疗提供参考。以乳腺癌为例，乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，年发病数占全球癌症新发病例数23％，死亡人数占14％，位居女性肿瘤发生首位(Jemal A，et al.CA Cancer J Clin，2011)。临床实践(OlivottoIA，etal.JClinOncol，2004)表明：当ER、PR表达均为阳性时，内分泌治疗药物三苯氧胺(Tamoxiefen，TAM)治疗有效率为60％～75％，而两者之一为阳性时(ER+PR-或ER-PR+)有效率下降至35％～50％，表明ER、PR表达与内分泌治疗疗效密切相关，其检测结果将直接决定治疗方案的选择。另一方面，在20％～30％的乳腺癌患者中存在HER2基因的扩增及其编码蛋白的过表达(SlamonDJ，et al.Science，1989)，对这些患者来说，内分泌治疗和标准化疗的治疗效果并不理想，抗HER2抗体药物可改善这部分癌症患者的预后。同样的在子宫内膜癌中，HER2、ER、PR的表达显示类似的结果。可选择类似的治疗方案对患者进行治疗。

目前肿瘤诊断主要依赖于病理学、影像学和血清学三种方法。病理学是肿瘤诊断的金标准，但是组织取样具有一定的创伤性，且受限于取材部位，同时由于肿瘤组织的异质性，单点组织取样不足以反应整体肿瘤状态，且难以重复取样动态监测。影像学方法在诊断肿瘤中作用较广泛，但是影像学一般存在辐射伤害。而且，影像学通常只反应肿瘤大小等信息，难以判断肿瘤的恶性程度。更重要的一点，影像学通常只能检测2mm以上的肿瘤组织，对于较小的肿瘤组织诊断敏感性较差，存在滞后性。血清学目前通常用于辅助判断癌症治疗疗效等信息，取样较为方便，但是灵敏度和特异性较差，且与病理生理相关性差。同样的，在治疗方面，目前临床上也存在一定的局限性。对于肿瘤患者，特别是发生转移的患者，目前通常只依据原发灶的信息来判断治疗方案，忽略了对转移灶甚至微转移灶的检测与治疗。治疗过程中，目前主要通过影像学或血清学来判断治疗疗效，在疗效判断的精准性等方面存在一定的局限。