[发明专利]一种细胞冻存载杆及其制备方法和应用

说明书

本发明实施例提供了一种细胞冻存载杆，包括杆柄部和与所述杆柄部相连的细胞附着部，所述细胞附着部包括第一表面，所述第一表面上设有至少一个囚禁凹槽，且所述第一表面上围绕所述囚禁凹槽设有疏水区。所述细胞冻存载杆可以有效避免生物样品的丢失，有效保护生物样品不被残留液体的冰晶损伤，提高生物样品存活率及活性。本发明还提供了一种细胞冻存载杆的制备方法和应用。

技术领域

本发明涉及生物材料冻存技术领域，特别是涉及一种细胞冻存载杆及其制备方法和应用。

背景技术

近年来，不孕不育症者发病率呈上升趋势，体外辅助生殖技术显得尤为重要。体外生殖技术最重要的环节是胚胎或卵细胞冻存。目前广泛采用的是玻璃化冷冻技术，该项技术具有冷冻速度快，避免冰晶形成、减少冷融损伤并且操作简单等优点，且有较高的复苏后的存活率和妊娠成功率。目前玻璃化冷冻技术中使用的玻璃化冷冻液主要由基础液，平衡液和玻璃化液组成，胚胎生物样品需依次通过以上液体进行玻璃化冷冻保护之后才可进入液氮中，进行快速冷冻并长期保持。迄今为止，玻璃化冷冻技术中常采用的载体包括冷冻管、开放式拉长细管、电镜用铜网、冷冻环(Cryoloop)、铝箔片和载杆等。其中，载杆常用于开放性冻存，即将胚胎等样品直接接触液氮的冻存，具有降温快、冷冻保护效果显著等优势；同时，在解冻复苏时，只需将载杆从液氮中取出，便可立即进行解冻操作，相比于其他载体更加便捷。

然而，现有的载杆的表面光滑，在进行冻存时，将胚胎或卵细胞等生物样品小液滴滴在载杆上时，会存在生物样品吸附不稳，操作过程中容易造成生物样品丢失情形。同时，现有载杆容易残留过多的液体(例如玻璃化液)，以致后续的冻存过程中，所述液体容易影响生物样品的降温速率，对生物样品解冻复苏生物活性存在巨大影响；并且液体形成的冰晶容易对生物样品存在物理伤害。因此，有必要开发一种能够有效避免生物样品丢失，提高生物样品存活率且方便实用的载杆。

发明内容

有鉴于此，本发明实施例提供了一种细胞冻存载杆及其制备方法和应用，其中，所述细胞冻存载杆可以有效避免生物样品的丢失，有效保护生物样品不被残留液体的冰晶损伤，提高生物样品复苏存活率。

第一方面，本发明提供了一种细胞冻存载杆，包括杆柄部和与所述杆柄部相连的细胞附着部，所述细胞附着部包括第一表面，所述第一表面上设有至少一个囚禁凹槽，且所述第一表面上围绕所述囚禁凹槽设有疏水区。

可选地，所述疏水区包括阵列排布在所述第一表面上的多个凸起。

可选地，相邻两个所述凸起的中心间距为40-80μm；每个所述凸起的截面直径为10-40μm。

可选地，所述囚禁凹槽的截面直径为100-230μm；所述囚禁凹槽的深度为100-200μm。本发明所述囚禁凹槽可用于囚禁胚胎细胞、卵细胞或其他细胞等生物样品，可以有效防止所述生物样品的丢失；同时，囚禁在所述囚禁凹槽内的生物样品避免了整个冻存过程中反复经转移的过程，大大减少冻存操作的时间，提高冻存操作的效率。

可选地，所述凸起包括圆柱形和棱柱形中的一种或两种。

可选地，所述疏水区包括涂布在所述第一表面的疏水材料层。

可选地，所述生物样品包括胚胎和卵细胞中的一种或多种。所述生物样品还包括组织细细胞或组织。优选地，所述生物样品包括胚胎和卵细胞中的一种或多种。

本发明第一方面所述的细胞冻存载杆，设有囚禁凹槽可以有效囚禁并锁定目的生物样品；设有具有良好作用的疏水区，所述疏水区可以有效减少在所述细胞冻存载杆的细胞附着部上生物样品的多余液体，使所述囚禁凹槽内的生物样品尽可能避免多余液体对自身的损害，并且在整个细胞冷冻过程中维持一个较快的降温速率，大大提高生物样品的复苏存活率及生物活性。

第二方面，本发明提供了一种细胞冻存载杆的制备方法，包括采用热压印法或浇铸成型法制备得到所述细胞冻存载杆。