[发明专利]Wasabi蛋白纳米抗体及其编码序列与应用在审
| 申请号： | 201810906228.5 | 申请日： | 2015-11-02 |
| 公开（公告）号： | CN109053884A | 公开（公告）日： | 2018-12-21 |
| 发明（设计）人： | 李淑锋;单海涛;马芳 | 申请（专利权）人： | 东南大学 |
| 主分类号： | C07K16/18 | 分类号： | C07K16/18;C12N15/13;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/68;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 丁静静;肖明芳 |
| 地址： | 211102 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 抗体 蛋白纳米 大肠杆菌 蛋白标签 定量检测 融合蛋白 双抗体夹心酶联免疫吸附 蛋白 特异性单克隆抗体 酶联免疫吸附 氨基酸序列 核苷酸序列 可溶性表达 编码序列 高灵敏度 检测 包被 应用 骆驼 筛选 试验 | ||
1.一种Wasabi蛋白纳米抗体，其特征在于，所述的Wasabi纳米抗体的VHH链包括框架区和互补决定区，
其中，
所述的框架区包括以下4段氨基酸序列：如SEQ ID NO：8所示的FR1，如SEQ ID NO：9所示的FR2，如SEQ ID NO：10所示的FR3，如SEQ ID NO：11所示的FR4；所述的互补决定区包括以下3段氨基酸序列：如SEQ ID NO：12所示的CDR1，如SEQ ID NO：13所示的CDR2，如SEQ IDNO：14所示的CDR3。
2.一种Wasabi蛋白纳米抗体，其特征在于，所述Wasabi纳米抗体的氨基酸序列如SEQID NO：16所示。
3.一种编码Wasabi蛋白纳米抗体的基因，其特征在于，其核苷酸序列，如SEQ ID NO：18所示。
4.一种重组质粒，其特征在于，该重组质粒中包含SEQ ID NO：18所示核苷酸序列。
5.一种重组细胞，其特征在于，该重组细胞中包含SEQ ID NO：18所示核苷酸序列。
6.权利要求1～2中任一项所述Wasabi蛋白纳米抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将Wasabi蛋白纳米抗体的核苷酸序列克隆至表达载体中，得到重组质粒，将该重组质粒转化宿主细胞，诱导表达纳米抗体蛋白；
(2)从宿主细胞中纯化Wasabi蛋白纳米抗体。
7.根据权利要求6所述的Wasabi蛋白纳米抗体的制备方法，其特征在于，所述的表达载体为PET32b，所述的宿主菌为大肠杆菌。
8.根据权利要求6所述的Wasabi蛋白纳米抗体的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，利用Ni-IDA亲和层析的方法纯化Wasabi蛋白纳米抗体。
9.权利要求1～2中任一项所述Wasabi蛋白纳米抗体在检测Wasabi蛋白中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的Wasabi蛋白为Wasabi标准蛋白或Wasabi融合蛋白，采用双抗体夹心酶联免疫吸附的方法检测Wasabi蛋白。
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