[发明专利]一种日本黄姑鱼的鱼皮免疫调节肽的制备方法

权利要求书

1.一种日本黄姑鱼的鱼皮免疫调节肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)用水将鱼皮清洗干净后剪片、脱脂待用；

(2)将脱脂后的鱼皮置于低浓度碱液中浸泡，然后用水洗至中性后冷冻备用；

(3)将步骤(2)处理后鱼皮置于水中，加酸液调节pH值2.0～4.6得浸泡液，向浸泡液中加鱼皮质量1％～5％的还原胺化试剂搅拌处理3～5小时，过滤鱼皮并冲洗至中性后冷冻备用；

(4)向步骤(3)处理后的鱼皮加入30～50倍质量的水后匀浆，加热至水温50～60℃后加入蛋白提取酶处理，然后加热灭酶活性后离心分离，所得上清液为鱼皮蛋白原液；

(5)向鱼皮蛋白原液中加入蛋白分解酶处理，然后加热灭酶活后离心分离得到酶解液；

(6)真空冷冻干燥酶解液得到鱼皮免疫调节肽干粉；

所述步骤(2)中所述低浓度碱液为质量浓度2～5wt％的氢氧化钠溶液或碳酸钠溶液，浸泡温度25～30℃，浸泡时间12～24h；

所述步骤(3)中所用酸溶液为酒石酸与醋酸、柠檬酸或苹果酸的混合溶液；

步骤(3)中浸泡液的温度≤38℃；

所述步骤(3)还包括在搅拌的过程中向浸泡液施加低压脉冲电场，低压脉冲电场的电压为60～100V，频率为20～25Hz；

所述蛋白提取酶的酶活力为7000～10000U/g，处理时间10～16h；

步骤(5)中蛋白分解酶为中性蛋白酶和金属蛋白酶的混合物，两者质量比为1:0.2～0.5，分解温度为40～50℃。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)脱脂过程如下：向鱼皮中加水，加入鱼皮质量0.2～0.6wt％的番茄红素与维生素C混合物，维生素C与番茄红素质量比为1:0.1～0.2，然后加脂肪酶30～40℃一次脱脂2～4h，脂肪酶活力为30000～50000U/g，冲洗鱼皮至无番茄红素色后置于20～30wt％异丙醇溶液二次脱脂2～4h，冲洗鱼皮至无异丙醇味。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中酸溶液中，酒石酸的质量百分比为50wt％～70wt％。

4.根据权利要求1或3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中调节的浸泡液的pH值为2.8～4.0。

5.根据权利要求1或3所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所用还原胺化试剂为硼氢化锌、硼氢化钠、醋酸硼氢化钠或氰代硼氢化钠中的一种。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中的蛋白提取酶为木瓜蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、曲霉菌丝氨酸蛋白酶和碱性蛋白酶中的一种或多种。

7.根据权利要求1或6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中分解时间3～5h。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述金属蛋白酶为多粘芽孢杆菌产生的中性金属蛋白酶。