[发明专利]人DPP4基因敲入的小鼠模型、其产生方法和用途

说明书

本发明提供了基因组中敲入了人DPP4基因的小鼠、其产生方法和用途。具体而言，本发明在不改变小鼠DPP4功能的情况下，将人DPP4准确插入到小鼠基因组中安全港基因座处，建立了在小鼠安全港基因座处人DPP4基因纯合的新型敲入小鼠模型。本发明还提供了所述在基因组中敲入了人DPP4基因的小鼠模型的用途，用于在BSL‑3设施中使用低剂量MERS‑CoV真病毒感染所述小鼠并评估抗MERS‑CoV的抗病毒剂和疫苗的体内功效，或者在缺乏BSL‑3设施的生物实验室中使用假型MERS‑CoV病毒感染所述小鼠并评估抗病毒剂和疫苗的体内功效。

技术领域：

本发明涉及基因组中敲入了人二肽基肽酶4(hDPP4)基因的小鼠、其产生方法和用途。具体地，本发明在不改变小鼠二肽基肽酶4(mDPP4)功能的情况下，将hDPP4基因准确插入到小鼠基因组中安全港(safe harbor)基因座处，建立了在小鼠安全港基因座处hDPP4基因纯合的新型敲入小鼠模型。所述hDPP4基因敲入小鼠是遗传稳定的，能够在生物安全水平-3(biosafety level-3；BSL-3)设施中使用低剂量MERS-CoV真病毒感染所述小鼠并评估抗MERS-CoV的抗病毒剂和疫苗的体内功效，也能够在缺乏BSL-3设施的生物实验室中使用假型MERS-CoV病毒感染所述小鼠并评估抗病毒剂和疫苗的体内功效。

背景技术

大多数感染人类的冠状病毒引起轻度的上呼吸道疾病，但是，2012年6月在中东地区出现的一种与人类严重呼吸系统疾病相关的新型β冠状病毒－中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus(MERS-CoV))(Zaki AM等人，Isolation of a novel coronavirus from a man with pneumonia in Saudi Arabia.NEngl J Med，367(19):1814–1820(2012))引起严重的下呼吸道疾病，使患者短期内快速进展为呼吸衰竭。根据WHO的报告，MERS-CoV病毒是冠状病毒科生物安全水平三级(BSL-3)病毒。自2012年9月在沙特阿拉伯首次分离出MERS-CoV病毒以来，在27个国家中已经导致2121例实验室确诊的人类感染病例，其中包括740例相关的死亡病例(约35％死亡率)(参见http://www.who.int/emergencies/mers-cov/en/)。

MERS-CoV病毒的流行病学趋势不同于与其基因学上密切相关的重症急性呼吸综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndromes coronavirus(SARS-CoV)。SARS-CoV病毒自2005年以来没有进一步的病例报导(L.Du等人,Recombinant receptor-bindingdomain of SARS-CoV spike protein expressed in mammalian,insect and E.colicells elicits potent neutralizing antibody and protective immunity.Virology393,144-150(2009))，但是，感染MERS-CoV病毒的病例和受感染国家却一直在持续增加。流行病学研究表明，防止MERS-CoV病毒潜在的流行病学状况将是一场漫长且艰难的战斗(G.Zhao等人,A safe and convenient pseudovirus-based inhibition assay todetect neutralizing antibodies and screen for viral entry inhibitors againstthe novel human coronavirus MERS-CoV.Virology journal 10,266(2013))。不幸的是，迄今为止尚无临床批准的针对MERS-CoV病毒的抗体、化学药物或疫苗。

本领域迫切需要模拟由MERS-CoV病毒感染引起的人类发病的临床前动物模型，用来开发针对MERS-CoV病毒的疫苗和疗法。