[发明专利]用于鳗弧菌特异性识别的ssDNA核酸适配体及筛选与应用

说明书

本发明是一种用于鳗弧菌（Vibrio anguillarum）特异性识别的ssDNA核酸适配体，所述核酸适配体的核苷酸序列为Apt‑Va01和Apt‑Va02中所示的DNA片段的核苷酸序列。本发明还详细阐述了对该核酸适配体的筛选方法。本发明提供了一条特异性强，亲和力高，检测限低的鳗弧菌核酸适配体，能够快速的对鳗弧菌菌体细胞进行检测，可被应用于食品加工、水产养殖、医学诊断、环境检测等过程中鳗弧菌的快速检测。

技术领域

本发明属水产病害微生物检测技术领域，具体涉及一种可用于特异性检测鳗弧菌（V. anguillarum）的ssDNA核酸适配体，本发明还涉及该ssDNA核酸适配体的筛选与应用。

背景技术

鳗弧菌（V. anguillarum）是水产养殖中危害最为严重的致病菌株之一。当水产养殖动物受到环境改变、应激反应或受伤等条件下，鳗弧菌可引发疾病的产生。该菌可感染鲑鱼、虹鳟、鳗鲡、香鱼、鲈鱼、鳕鱼、大菱鲆、牙鲆、黄鱼等鱼类。研究报道，部分感染鳗弧菌的水产动物体表最初出现局部褪色，鳍条、鳍基部及鳃骨下部充血发红，肛门红肿，继而肌肉组织有弥撒性或点状出血，体表发黑，鳍部出现溃烂，解剖检验时有明显的黄色粘稠腹水，肠粘膜组织腐烂脱落，部分鱼肝脏坏死。感染鳗弧菌后的水产动物表现出病情逐步加重的症状，并最终引起死亡。早期、快速诊断对疾病控制与治疗很重要。

上世纪九十年代出现的系统进化配体指数富集技术(Systematic Evolution ofLigands by Exponential Enrichment, SLEXE)使核酸适配体的筛选研究工作得到了进一步发展。采用SELEX技术可从一个随机寡核苷酸文库（10¹³~10¹⁵）中筛选到的精准识别特定靶标的高特异性和亲和性的适配体（aptamers），这些适配体可被广泛应用于生物制药、分子生物学、微生物学、医学诊断治疗、环境检测等研究领域。适配体与其他生物分子相比拥有很多优良特性：易合成、易修饰、稳定性好、灵敏度高、靶标范围广、特异性强、pH范围广、免疫原性低等。

以鳗弧菌作为靶标的核酸适配体的筛选并进行快速检测具有重要意义。利用SELEX技术筛选得到针对于鳗弧菌菌体细胞的高特异性和亲和力的核酸适配体，可以用于环境检测和鳗弧菌所引发的疾病病原的快速诊断。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种新的用于鳗弧菌快速检测的ssDNA核酸适配体。

本发明的另一个目的是提供了前述ssDNA核酸适配体的筛选方法。

本发明的另一个目的是提供了前述ssDNA核酸适配体检测鳗弧菌的用途。

本发明的目的是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种用于鳗弧菌（Vibrio anguillarum）特异性识别的ssDNA核酸适配体，其特点是：所述核酸适配体的核苷酸序列为Apt-Va01和Apt-Va02中所示的DNA片段的核苷酸序列：

Apt-Va01：5’-CTGCAGAATTCTAATACGAGTCACTATAGGAAGATGGCGAAACATCTTATCGAATTGTAGACGACGCTTTAGGTCCCTCTTGACGCGCAGTATGATACCTGTATTACCGTGGCGTGCATGTCTGCTGTTAGTGACGGTAAGCTTGGCAC -3’；

Apt-Va02：5’-CTGCAGAATTCTAATACGAGTCACTATAGGAAGATGGCGAAACATCTTAGTAAGTCTTCTCTTCGGAACATTATCCAAAAATTGGATATCCTACTCTTATGGGTGATAGATGTGTATGTACGTCTAGATAGTGACGGTAAGCTTGGCAC -3’。