[发明专利]检测猪尿中沙丁胺醇的银纳米粒子消光免疫层析试纸条

说明书

本发明为检测猪尿中沙丁胺醇的银纳米粒子消光免疫层析试纸条，属分析检测领域，公开了检测小分子物质的免疫层析试纸条：将修饰牛血清白蛋白的荧光物质分别与检测抗原以及抗免疫球蛋白G抗体混合，喷涂在试纸条特定区域上做为检测线及质控线，标记特异性单克隆抗体的银纳米粒子(银消光探针)喷涂在试纸条结合垫。当样品溶液不存在待测物时，银消光探针与检测线上检测抗原结合，吸收了荧光物质的激发光或发射光而使检测线无荧光，而质控线有荧光；当样品溶液存在待测物时，银消光探针优先与待测物结合，此时结合在检测线上的银消光探针数量减少，而结合在质控线上的银消光探针数量增加，导致试纸条检测线荧光增加，而质控线荧光下降。本发明较传统免疫层析试纸条检测小分子物质的消线判读模式更灵敏。

技术领域

本发明属于免疫学分析检测技术领域，涉及检测猪尿中沙丁胺醇的银纳米粒子消光免疫层析试纸条。

背景技术

免疫层析技术具有速度快、抗基质干扰能力强、操作简便等优点，是现场快速筛查的首选方法，也是食品安全、医药卫生、环境保护等领域创新研究的热点。近年来，基于免疫层析技术的胶体金试纸条得到了广泛应用，然而传统的胶体金免疫层析方法因检测灵敏度不高，在检测某些微量或痕量分析物如食品中污染的真菌毒素等方面仍存在较大缺陷。因此，提高免疫层析方法的检测灵敏度对于拓延其适用范围具有非常重要的意义。荧光标记物与传统胶体金标记物相比，具有更高的信号强度，可提高试纸条检测灵敏度。

利用试纸条检测小分子待测物，通常使用竞争反应模式，即检测线上的人工抗原与待测物共同竞争荧光物质标记的抗体，检测信号强度与待测物含量成反比关系，当待测物含量处于较低水平时，较强的检测信号对待测物含量的微小变化并不敏感，因此灵敏度偏低。在竞争免疫层析试纸条上构建荧光消减模式可以使待检物浓度与荧光强度成正比，即待检物在痕量存在时荧光信号从无到有，可以提高检测灵敏度和准确性。相较于常规胶体金粒子，银纳米粒子具有更高的摩尔消光能力，因此具有更强的荧光消减能力，从而可进一步提高试纸条检测灵敏度。此外，银纳米粒子的消光光谱随粒子粒径增加而增大，银纳米粒子粒径从10nm到100nm，对应的表面等离激元共振(SPR)吸收峰从400nm到500nm，拓宽了胶体金荧光“淬灭”免疫层析试纸条荧光物质的选择范围(金纳米粒子SPR吸收峰在500nm以上)。

发明内容

本发明的银纳米粒子消光免疫层析试纸条基于银纳米粒子吸收荧光物质的激发光或发射光而导致其荧光信号减弱，用于快速定性和定量检测小分子物质。银纳米粒子消光免疫层析试纸条的结构组成见附图1所示，包括滤纸、样本垫、结合垫、NC膜和吸水纸等五部分组成，其中滤纸、样本垫与结合垫层叠组装在NC膜一端，吸水纸层叠在NC膜另一端，五部分整体固定在粘性卡纸上。荧光物质-BSA与待测小分子物质检测抗原混合固定在试纸条检测线，荧光物质-BSA与IgG Fc片段特异性识别抗体(二抗)混合固定在试纸条对照线(质控线)，银纳米粒子与小分子物质特异性抗体复合物(银消光探针)固定在试纸条结合垫上，待检物质溶液通过滤纸过滤，经样本垫进入结合垫，待测小分子与银消光探针结合，在吸水纸毛细作用下，待检溶液在试纸条上流动，继续前进到达检测线，未与待测小分子结合的银消光探针与检测线上的检测抗原结合，其余的银消光探针继续前进到达质控线与二抗结合。加样十至二十分钟后，试纸条在荧光读取仪中读取检测线和质控线的荧光数值。由于银纳米粒子特异性的吸收荧光物质的激发光或发射光，导致检测线上的荧光值与银粒子数量成反比例，而与待检小分子物质的浓度成正比例关系，样品中不含待检小分子物质时，检测线上没有荧光信号。本发明所述的一种检测小分子物质的银纳米粒子消光免疫层析试纸条，制备方法为：

(1)荧光物质与牛血清白蛋白(简称BSA)通过羧基和氨基间共价键结合

所选用的荧光物质为荧光微球、量子点微球、量子点或荧光染料；荧光物质需先经过表面氨基或羧基修饰，再与BSA上的羧基或氨基通过1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(简称EDC)活化共价结合，得荧光物质-BSA；荧光物质的最适激发波长和最大发射波长二者至少其一在400nm至500nm之间；