[发明专利]一种可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法

权利要求书

1.一种可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一，在真空条件下，将牛心包置于非离子型去污剂缓冲液中冷冻2～6h；

步骤二，冷冻结束后，将冷冻后的所述牛心包水浴溶解；

步骤三，重复步骤一与步骤二1～10次，将所述牛心包进行多次冻融；

步骤四，将多次冻融后的所述牛心包放置于非离子型去污剂缓冲液中，并在30～50℃摇床中处理震荡28～96h；

步骤五，用无菌去离子水对震荡后的所述牛心包震荡清洗12～48h；

步骤六，用磷酸盐溶液对无菌去离子水清洗后的所述牛心包荡清洗48～96h后，得到牛心包的脱细胞基质；

步骤七，将所述脱细胞基质浸没在生物活性因子琼脂糖材料中20min～2h，得到可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质，

其中，所述非离子型去污剂缓冲液包括：Tris缓冲液、非离子型去污剂以及脱氧胆酸钠，

所述Tris缓冲液的浓度范围为8～12mmol/L，PH值为7.4～7.8，

所述非离子型去污剂在所述Tris缓冲液的体积分数范围为0.8％～1.5％W/V，

所述脱氧胆酸钠在所述Tris缓冲液的体积分数范围为0～0.8％W/V。

2.根据权利要求1所述的可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法，其特征在于：

其中，在步骤七中，所述生物活性因子琼脂糖材料中的生物活性因子为具有生物活性的生长因子。

3.根据权利要求1所述的可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法，其特征在于：

其中，在步骤七中，所述生物活性因子琼脂糖材料中的生物活性因子的浓度范围为2.0～12.0μg/ml。

4.根据权利要求1所述的可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法，其特征在于：

其中，所述去污剂为聚乙二醇辛基苯基醚。

5.根据权利要求1所述的可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法，其特征在于：

其中，在步骤二中，所述水浴的温度为30～50℃。

6.根据权利要求1所述的可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法，其特征在于：

其中，所述Tris缓冲液的浓度为10mmol/L，PH值为7.6。

7.根据权利要求1所述的可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法，其特征在于：

其中，在步骤一中，所述牛心包的冷冻时间为4～5h。

8.根据权利要求1所述的可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法，其特征在于：

其中，在步骤五中，所述去离子水的震荡清洗时间为24～36h。

9.根据权利要求1所述的可缓释生物活性因子的脱细胞牛心包基质的制备方法，其特征在于：

其中，在步骤六中，所述磷酸盐溶液的震荡清洗时间为72h。