[发明专利]主动脉基因突变检测用引物探针、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种主动脉基因突变检测用引物探针，其特征在于，所述的引物探针的序列包括：

野生探针P+1序列如SEQ ID NO.1所示；突变探针P-1序列如SEQ ID NO.2所示；

上游引物F1序列如SEQ ID NO.3所示；下游引物R1序列如SEQ ID NO.4所示；

或包括：

野生探针P+2序列如SEQ ID NO.5所示；突变探针P-2序列如SEQ ID NO.6所示；

上游引物F2序列如SEQ ID NO.7所示；下游引物R2序列如SEQ ID NO.8所示；

或包括：

野生探针P+3序列如SEQ ID NO.9所示；突变探针P-3序列如SEQ ID NO.10所示；

上游引物F3序列如SEQ ID NO.11所示；下游引物R1序列如SEQ ID NO.12所示。

2.一种主动脉基因突变检测用引物探针的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)配反应液：所述的反应液包括：所述的野生探针为权利要求1所述的野生探针P+1，P+2或P+3；所述的突变探针为权利要求1所述的突变探针P-1，P-2或P-3；所述的上游引物为权利要求1所述的上游引物F1，F2或F3；所述的下游引物为权利要求1所述的下游引物R1，R2或R3；

(2)分装，扩增；

(3)筛选：提取已经过测序确定野生和突变型的样本DNA用于探针引物筛选；得到权利要求1所述的引物探针。

3.根据权利要求2所述的主动脉基因突变检测用引物探针的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)配反应液：2xBuffer：12.5ul；上游引物：4ul；下游引物：4ul；野生探针：2ul；突变探针：2ul；Taq酶：0.5ul；H2O：4ul；DNA模板：5ul；

所述的野生探针为权利要求1所述的野生探针P+1，P+2或P+3；

所述的突变探针为权利要求1所述的突变探针P-1，P-2或P-3；

所述的上游引物为权利要求1所述的上游引物F1，F2或F3；

所述的下游引物为权利要求1所述的下游引物R1，R2或R3；

(2)分装，扩增：将反应液按20l/管分装至对应的PCR扩增管中后加5 l DNA模板进行扩增；扩增条件：37℃3min→95℃3min→(95℃10s→59℃40s)35cycles；

(4)筛选：提取已经过测序确定野生和突变型的样本DNA用于探针引物筛选；得到权利要求1所述的引物探针。

4.一种主动脉基因突变检测用试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物探针。

5.一种主动脉基因突变检测用试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)引物探针稀释

(2)配制反应液：所述的反应液包括权利要求1所述的引物探针；

(3)分装、组装：将配制好的反应液、灭菌水、质粒按照分别装入冷冻管中：将所述的冷冻管标记后组装入试剂盒。

6.根据权利要求5所述的主动脉基因突变检测用试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)引物探针稀释

(2)配制反应液：按照配方将原料依次混合后，放在摇床摇1h得到反应液；所述的配方为：2xBuffer：12.5ul；上游引物：1.0ul；上游引物：1.0ul；野生探针：0.3ul；突变探针：0.5ul；DEPC水：4.7ul；

(3)分装、组装：将配制好的反应液、灭菌水、质粒按照分别装入冷冻管中：将所述的冷冻管标记后组装入试剂盒。

7.一种非疾病诊断用主动脉基因突变检测方法，其特征在于，采用权利要求1所述的引物探针进行检测。