[发明专利]用于鉴定胃癌和/或胃息肉的试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种用于鉴定胃癌和/或胃息肉的试剂盒及其应用，试剂盒包括用于检测来自受试者的生物样品中生物标志物基因或相应片段的甲基化水平的引物对；引物对用于以经亚硫酸氢盐处理的生物标志物基因或其片段为模板进行PCR扩增反应；生物标志物基因选自CDH1、DAPK、PAX5、RASSF1A、Reprimo、RNF180、RUNX3、SDC2、Septin9和TCF4中的一种或多种。本发明通过联合检测生物标志物基因或相应片段的甲基化水平，使得胃癌和/或胃息肉检测的灵敏度和特异性得到了提高，从而保证了检测结果的正确性和可靠性，为胃癌和/或胃息肉的预测、诊断和评估提供了一条快速、可靠、准确的新途径。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于鉴定胃癌和/或胃息肉的试剂盒及其应用。

背景技术

胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一。根据WHO提供的数据：全球有超过150万的胃癌患者，其死亡率在全球癌症死亡中排名第三。胃癌最普遍发生于东亚以及东欧地区。全球新增胃癌病例和相关死亡人数中，中国占比均已超过40％，位居世界前列。加上日本和韩国，胃癌率约占全球患者的2/3。WHO附属机构国际癌症研究机构(IARC)推测东北亚三国的高胃癌发病率可能与人种(遗传)、饮食习惯、高龄化有关。就胃癌的发病率而言，男性通常是女性的2-3倍，且在35岁之后会快速增高。胃癌发病的最高中位年龄是50-60，并趋于年轻化。胃癌的疾病分期是最重要的预后因素，早期胃癌病人的5年生存率可达90％以上，而晚期则低于10％。然而胃癌病人在医疗机构就诊时疾病往往已进展到中晚期，其治疗效果与预后较差，例如在中国，临床发现的胃癌初期患者比率仅为22.1％，三期患者比率为38.5％，四期患者比率为15.4％，这直接导致了中国胃癌患者治疗的预后效果不佳。而全球大部分国家和地区胃癌的5年相对生存率也仅在20％左右。日本的I、II期胃癌5年生存率在70％以上，这与日本自上世纪60年代开始的人群胃癌筛查项目，且胃癌病中有较高比例的早期病例有关。

胃癌主要是由内镜取出的组织学标本来确诊的，但诊断技术并没有在很大程度上降低胃癌患者的死亡率，因此，如何提高胃癌患者的生存率，依赖于胃癌的早期诊断，筛选和挖掘有价值的早期胃癌的生物学标志物成为亟待解决的问题。由于影像学技术在胃癌早期筛查中未能显示出良好的效果，人们开始将目光转移至胃癌早期诊断的分子标志物，遗憾的是迄今为止没有发现一个敏感性和特异性较高的分子标志物。与影像学检查比较，内镜检查法可以直接观察病变形态，活检准确率高。ct模拟胃镜诊断早期胃癌的阳性符合率达到70％以上，最小可显示黏膜病灶的直径达到1厘米左右。但是胃镜检查的过程非常痛苦，真正能够做到定期内镜检查的病人不足10％。

近年来胃癌表观遗传学研究进展较快，特别是DNA甲基化，研究发现在胃癌发生的早期就存在很多特有的肿瘤相关基因出现不同程度的甲基化状态改变，为胃癌早期诊断标志物的探索提供了新的契机。

基因组的DNA甲基化异常与肿瘤的发生一直是医学界研究的热点之一，细胞周期、DNA修复、血管生成和凋亡等都涉及到相关基因的甲基化。DNA高甲基化最可能的调控作用是通过抑制关键基因的表达，从而决定该细胞的命运，如对于肿瘤细胞中DNA甲基化异常现象的研究已经在多种肿瘤中取得了许多重大的进展。哺乳动物中，甲基化仅影响DNA链上鸟嘌呤前的胞嘧啶(CpG)，正常细胞中CpG双核苷酸的甲基化分布并不均一，大约50％的基因在启动子区域有CpG集中分布的CpG岛存在，长度0.5～2kb不等，该区域与基因的转录调控有着密切关系。人体某些基因调控区域的CpG岛甲基化在相关癌细胞组织中频繁出现，显示出与某些肿瘤的发病、病程进展和预后、用药敏感性等相关。迄今为止，已在大多数人类肿瘤中发现了基因甲基化异常，研究发现在癌细胞中表观遗传编码发生紊乱，首先表现在DNA甲基化水平紊乱，又称为甲基化重排。由于抑癌基因CpG岛的局部高度甲基化早于细胞的恶性增生，因此，DNA甲基化的检测可以用于肿瘤发生的早期诊断。癌症相关基因甲基化也是胃癌发生的早期事件，因此相关基因甲基化状态成为早期胃癌风险预测有效指标。尽管如此，目前仍缺乏对这些癌症相关基因的甲基化状态进行有效检测并对检测结果进行处理的手段。