[发明专利]壳聚糖和唑来膦酸钠纳米化结核杆菌气溶胶的制备方法

说明书

本发明涉及气溶胶制备领域，特别公开了一种壳聚糖和唑来膦酸钠纳米化结核杆菌气溶胶的制备方法。本发明通过异硫氰酸荧光素（FITC）探针标记CM，通过锝99m（⁹⁹Tc^m）标记ZOL，利用化学及化工技术、核医学及骨显像技术、微生物和气溶胶发生技术使制备的FITC‑CM/⁹⁹Tc^m‑ZOL纳米化H37Rv气溶胶具有稳定性、可控性、示踪性和靶向性；为骨关节TB病的研究提供可靠的动物模型。具有显著的应用价值。本发明工艺简单，产品稳定性、可控性、靶向性和示踪性均满足作为骨关节结合动物模型构建的有效感染源要求，生产成本相对较低，适于广泛推广应用。

（一）技术领域

本发明涉及气溶胶制备领域，特别涉及一种壳聚糖和唑来膦酸钠纳米化结核杆菌气溶胶的制备方法。

（二）背景技术

结核病(tuberculosis, TB)一直是人们关注的一个全球性健康问题，据世界卫生组织估计，全球约有1/3人口感染结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis， MTB )，也就是20亿人口感染过MTB。全球有活动性肺结核病人口约2000万，平均每人每年可以传染10-15人。每年新发TB患者约800-1000万，每年约有300万人死于TB。卫生服务体系的不力，艾滋病和耐药结核的传播加剧了TB对人类的威胁。据估计，如果不能有效控制TB，2000年到2020年间，将有10亿人感染MTB，2亿人将发展为TB，3500万人将死于TB。我国的TB人数位居世界第二，每年新增TB患者约150万例，受感染人数约4.5亿。

TB的典型特征是干酪样肺病变，但结核分枝杆菌通过淋巴或者血液循环播散可引起肺外病变，所有TB病例中，肺外结核发病率约20%-40%。骨关节TB在肺外TB中发病率最高，约占所有肺外TB病例的11%，最常见好发部位是脊柱，其次是髋关节和膝关节，常常导致骨髓炎、椎旁脓肿、结核性关节炎和肉芽肿。其中脊柱TB几乎占所有骨关节TB的一半。

微生物气溶胶是大气中具有生命的气溶胶粒子（包括细菌、真菌、病毒等微生物粒子）、活性粒子（花粉、孢子等）及由有生命活性的机体所释放到空气中的各种质粒的统称。它们的粒径范围在10nm -100μm之间，其中，较大的花粉典型粒径为20-60μm，真菌孢子为1-30μm，细菌为0.25-8.00μm，病毒的粒径最小，通常小于0.3μm，且生物气溶胶中的小粒子(如病毒和细菌) 在大气中的驻留时间长达数天，可由大气输送很远的距离。这些有生命活性的物质通常都附着在大气中的非生物颗粒上，如病毒、细菌等微生物。小粒径微生物气溶胶粒子可以在空气中存在很长时间，并可随着空气流动最终被人和动物吸入，引起疾病的感染与流行。

目前，许多肺TB动物模型（包括小鼠、豚鼠、兔、猴子、山羊、牛和部分灵长类动物）都已经通过气溶胶暴露或经鼻气溶胶输送等方式成功建立了肺TB动物模型。而且，进一步研究经鼻或气溶胶暴露输送结核疫苗比经皮下注射疫苗更容易诱导免疫和保护。由此可见，结核分枝杆菌气溶胶是结核动物模型最佳感染源，经呼吸道是最佳感染途径。

微生物气溶胶具有6大特性：来源的多相性，种类的多样性，活性的易变性，播散的三维性，沉积的再生性，感染的广泛性。而研究结核分枝杆菌气溶胶的致病机制与机理，需要模拟制备可控性TB微生物气溶胶。另外，结核分枝杆菌气溶胶经呼吸道感染可引起多系统肺外结核，而建立骨关节TB结核动物模型需要有靶向性。为此，亟需模拟制备一种可控、稳定、靶向等特点的TB微生物气溶胶。

（三）发明内容

本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种工艺简单、稳定可控、靶向性强的壳聚糖和唑来膦酸钠纳米化结核杆菌气溶胶的制备方法。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种壳聚糖和唑来膦酸钠纳米化结核杆菌气溶胶的制备方法，以壳聚糖和唑来膦酸钠为原料，包括如下步骤：