[发明专利]一种青稞-内生真菌共生体的构建方法

说明书

本发明提供一种青稞‑内生真菌共生体的构建方法，包括以下步骤：(1)青稞种子的消毒；(2)青稞无菌苗的培养；(4)接菌：在青稞无菌苗上胚轴部位进行人工接菌：在青稞无菌苗上胚轴处竖切小口，将培养好的菌丝塞入小口处，置于恒温(25±2)℃条件下黑暗培养7‑10天，然后在恒温(25±2)℃、光照强度为2000～3000lx、光照时间16h·d^‑1条件下培养7‑10天，得到青稞幼苗；(5)移植：将的青稞幼苗洗净根部培养基后，移入基质中进行培养，直至种子收获；(6)内生真菌检测：移栽一段时间后检测内生真菌的接种情况，剔除接种未成功的幼苗，剩余幼苗成熟后收集种子。本发明通过在青稞上胚轴接种禾草内生真菌，构建了青稞‑内生真菌共生体，创建了新的青稞种质资源。

技术领域

本发明属于农业育种技术领域，具体涉及青稞-内生真菌共生体的构建方法。

背景技术

禾草-内生真菌共生体的双重特性已经成为近20年来研究的热点领域之一。有关内生真菌可提高禾草抗逆性、促进宿主生长已被国际学术界所公认。Neotyphodium内生真菌的侵染也可通过增强抗旱性、耐盐性、耐重金属和营养物质的吸收来促进生长、提高竞争力；亦可通过生物碱的产生来增加宿主对昆虫、线虫、家畜、野生动物、病原真菌以及病毒的抗性，进而影响草地植物群落演替，改变食物链结构。

目前，全世界的温带禾草中约有10％的种类带有内生真菌，利用内生真菌进行禾草育种，特别是抗性育种是近年来国外草业育种的一个趋势。这种育种方法借助内生真菌对禾草各方面的增益和内生真菌随宿主种子垂直传播的种传特性进行。利用内生真菌进行的育种具有以下优势：首先，内生真菌不产生子实体，缺乏有性繁殖，决定了内生真菌的寄生特性不会造成种间、个体间的泛滥传播，对环境具备安全性；其次，通过内生真菌介导的目的性状可较稳定的得到表达，且目的性状还可具有通过侵染植株形成的种子保留的可能性，对育种具备高效性。有国外学者以“下一代的分子育种”对内生真菌育种进行称赞。

目前，国外对牧草黑麦草、高羊茅等牧草进行了人工接种，并且成功地构建了人工共生体，但对于青稞-内生真菌共生体构建成功未见报道。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明将抗虫的内生真菌，通过人工转接的方法引入青稞，建立有益无害的青稞-内生真菌共生体，培育优良青稞新品种，进而为草地畜牧业的健康稳定持续发展提供保障。具体来说，本发明提供一种青稞-内生真菌共生体的构建方法，通过在青稞上胚轴接种禾草内生真菌，来构建新的共生体，创建了新的青稞种质资源。

本发明提供一种青稞-内生真菌共生体的构建方法，包括以下步骤：

(1)青稞种子的消毒；

(2)青稞无菌苗的培养：将步骤(1)中消毒处理好的种子，置于培养基上进行培养，得到青稞无菌苗；

(3)扩大培养内生真菌菌丝；

(4)接菌：在青稞无菌苗上胚轴部位进行人工接菌：在青稞无菌苗上胚轴处竖切2-3mm小口，将培养好的菌丝塞入小口处，置于人工气候箱恒温(25±2)℃条件下黑暗培养7-10天，然后在恒温(25±2)℃、光照强度为2000～3000lx、光照时间16h·d^-1条件下培养7-10天，得到青稞幼苗；

(5)移植：将步骤(4)中的青稞幼苗洗净根部培养基后，移入基质中进行培养，直至种子收获；

(6)内生真菌检测：移栽一段时间后检测内生真菌的接种情况，剔除接种未成功的幼苗，剩余幼苗成熟后收集种子。

作为优选，步骤(1)中，所述青稞种子的品种为柴青1号。

作为优选，步骤(2)中，所述培养基的制备方法为：在1L水中加琼脂30-40g，然后进行高温湿热灭菌。

作为优选，步骤(2)中，所述培养是于恒温培养箱(25±2)℃条件下黑暗培养3-5d。