[发明专利]一种测定奶粉中维生素A,E的方法

权利要求书

1.一种测定奶粉中维生素A,E的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)样品处理：将奶粉样品混匀，称取适量，加入水，无水乙醇，抗坏血酸，BHT及KOH水溶液，加热皂化，皂化完成后冷却定容；

2)采用结合柱切换技术的双梯度液相色谱仪测定步骤1)所得的溶液中是否含有维生素A,E：若液相色谱结果显示样品疑似含有维生素A,E时，则比较样品与维生素A,E标准物质的保留时间，以确认样品中是否含有维生素A,E；

3)若确认样品中含有维生素A,E，则通过公式计算样品中维生素A,E的含量；

步骤1)中，称取样品量为2g，样品中加入20mL温水，30mL无水乙醇，1g抗坏血酸，1g BHT与20mL 50％KOH水溶液，80℃水浴加热30min，完成后冷却至室温，用50％乙醇水溶液定容至100mL，取2mL过0.45μm滤膜，待上机分析；

步骤2)中，结合柱切换技术的双梯度液相色谱仪测定条件中，在线固相萃取部分的运行条件为：

(1)维生素A,E富集净化柱采用PLRP-S柱，规格为4.6×12.5mm，孔径15-20um；

(2)流动相为40％乙醇水溶液，运行时间为22min；流动相流速：0-4min为1mL/min；4-15min为0.2mL/min；15-22min为1mL/min，进样体积为200μL；

(3)外置六通阀3的流路设置为：0-4min为4→5→7→6；8→9；4-18min为8→7→5→9；4→6；18-22min为4→5→7→6；8→9；

步骤2)中，结合柱切换技术的双梯度液相色谱仪测定条件中，液相色谱仪的运行条件为：

(1)液相色谱柱采用Poroshell 120EC-C8柱，规格为4.6×100mm，粒径4μm；

(2)流动相为水和乙腈，采用梯度洗脱，运行时间为22min；流动相流速为1.5mL/min；

(3)采用紫外检测器，0-11min波长设置为325nm，11-22min波长设置为294nm。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)中，若样品中含有淀粉，则在皂化前加入适量淀粉酶。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2)中，经样品峰和标准品峰的保留时间相比较，确认色谱峰保留时间是否一致，从而确定样品中是否检出待测物维生素A,E。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤3)中，若确认样品中含有维生素A,E，则采用标准曲线外标法进行定量，再根据样品提取液中维生素A,E的含量，换算后计算样品中维生素A,E的含量。