[发明专利]一种抗菌肽天蚕素A突变体及其编码基因、制备方法和应用有效
申请号: | 201810868364.X | 申请日: | 2018-08-02 |
公开(公告)号: | CN109021086B | 公开(公告)日: | 2021-05-14 |
发明(设计)人: | 王菊芳;王蒙;马毅;傅宏鑫 | 申请(专利权)人: | 华南理工大学 |
主分类号: | C07K14/435 | 分类号: | C07K14/435;C12N15/12;C12N15/70;A61K38/17;A61P31/04 |
代理公司: | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人: | 宫爱鹏 |
地址: | 510640 广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 抗菌 天蚕 突变体 及其 编码 基因 制备 方法 应用 | ||
1.一种抗菌肽天蚕素A突变体,其特征在于,其氨基酸序列如SEQ ID No:3所示。
2.编码权利要求1所述抗菌肽天蚕素A突变体的基因,其特征在于,其核苷酸序列如SEQID No:4所示。
3.一种抗菌肽天蚕素A突变体的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)将权利要求2所述的突变体基因,连接到表达载体上,得到重组表达载体;
(2)将步骤(1)中得到的重组表达载体转化到大肠杆菌表达宿主菌中,得到工程菌;所述重组表达载体包含突变体融合蛋白,该融合蛋白的组成为:突变体-自剪切短肽-连接肽-自聚集短肽,所述的自剪切短肽为Mxe GyrA,自聚集短肽为ELK16;
(3)步骤(2)中得到的工程菌中加入IPTG进行诱导表达,离心收集菌体,破碎菌体,离心获得沉淀,再向沉淀中加入DTT进行诱导切割,离心收集上清,得到抗菌肽天蚕素A突变体。
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,
所述的自剪切短肽的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示;
所述的自聚集短肽的核苷酸序列如SEQ ID No:2所示;
所述的连接肽为PT linker,其核苷酸序列如SEQ ID No:5所示。
5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤(3)所述IPTG的浓度为0.1mM,DTT的浓度为10~80mM。
6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述诱导表达的温度为16℃,诱导表达的时间为24h;所述诱导切割的温度为在4℃,切割时间为12h。
7.根据权利要求3~6任意一项所述的制备方法,其特征在于,还包括将步骤(3)中得到的抗菌肽天蚕素A突变体进一步浓缩纯化,纯化方式为乙酸纯化,所用乙酸浓度为0.1%-1%(v/v)。
8.权利要求1所述的抗菌肽天蚕素A突变体在制备抗微生物感染药物中的应用。
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