[发明专利]一种检测配方奶粉中脂溶性维生素含量的方法及其样品前处理方法

说明书

本发明公开了一种检测配方奶粉中脂溶性维生素含量的方法及其样品前处理方法。本发明首先公开了检测配方奶粉中脂溶性维生素含量的样品前处理方法，包括：称取待测配方奶粉样品，加入抗坏血酸，无水乙醇以及KOH溶液进行皂化；向皂化后的溶液中加入正己烷，液液萃取后离心，收集上清液；将上清液氮吹至干，复溶，过滤，得待测溶液。本发明还公开了样品经前处理后通过超高效液相色谱‑三重四级杆质谱联用技术检测脂溶性维生素含量的方法。本发明方法简便、快速、灵敏、准确，可满足配方奶粉中脂溶性维生素的检测要求。

技术领域

本发明涉及食品检测领域。更具体地，涉及一种检测配方奶粉中脂溶性维生素含量的方法及其样品前处理方法。

背景技术

维生素是机体维持其正常生活所必需的一类营养素，也是婴幼儿配方奶粉中必须添加的成分。维生素的种类很多，化学结构各异，通常根据其溶解性分为脂溶性和水溶性两大类，在婴幼儿配方粉中添加的脂溶性维生素主要包括维生素A、D、E、K等。世界各国对婴幼儿配方粉中添加的维生素种类和含量有严格的规定。然而，婴儿配方粉中维生素的真实含量与实际标签值不符的情况时有发生。由于维生素摄入不足或过量均可导致机体功能障碍，因此对婴幼儿配方粉中的维生素质量进行评价是评判婴幼儿配方粉质量的重要指标。脂溶性维生素的检测方法包括反相液相色谱法、正相液相色谱法、液相色谱串联质谱法等。我国于2016年发布了GB 5009.82-2016《食品中维生素A、D、E的测定》以及GB 5009.158-2016《食品中维生素K1的测定》用于脂溶性维生素的检测。GB 5009.82-2016《食品中维生素A、D、E的测定》共包含四个方法，分别规定了采用液相色谱法测定维生素A 和维生素E、采用正相色谱法测定维生素E、采用液相色谱-串联质谱法测定维生素D以及采用高效液相色谱法测定维生素D。GB 5009.158-2016《食品中维生素K₁的测定》包含两个方法，第一法对维生素K1的检测需要采用锌还原柱柱后还原荧光检测器进行检测。由于受锌还原柱柱填充效果和还原效率的影响，维生素K₁的检测重复性较差。第二法采用了液相色谱-质谱法进行检测。采用的前处理方法需要经过脂肪酶酶解、正己烷提取、净化等步骤。在实际检测过程中，一个婴幼儿配方奶粉样品需要采取至少两种前处理方法以及多套仪器设备才可完成维生素A、D、E、K₁的测定分析。为实现多种脂溶性维生素的同时检测，张艳海等(张艳海，其布勒哈斯，金燕，王佳，马文丽,在线二维液相色谱法同时测定婴幼儿和成人配方营养品中的维生素A、D3和E.色谱,2015,33(03):291-297.)采用了在线二维液相色谱法，通过对一维色谱维生素D3进行富集，实现了在同一台仪器上同时检测维生素A、 D、E。随着分析技术的发展,多种维生素联合检测已成为维生素检测技术的发展趋势。采用液相色谱-串联质谱仪器替代传统的液相色谱检测，可以实现多维生素的同时检测，且灵敏度和选择性均优于液相色谱。朱姜等(朱姜，张鹏，杨嘉，邹勇平，周元元，张林.高效液相色谱-串联质谱法测定奶粉中的维生素A、维生素D、维生素E.中国卫生检验杂志,2015,25(11):1733-1736.)采用高效液相色谱-串联质谱法同时测定奶粉中的维生素A、维生素D、维生素E，但未对维生素K₁进行同时测定。赵孔祥等(赵孔祥，娄婷婷，何佳，陈其勇，葛宝坤，郑文杰.同位素稀释/液相色谱-串联质谱测定婴幼儿配方奶粉中脂溶性维生素.分析测试学报,2015,34(12):1372-1376.)采用同位素稀释/液相色谱-串联质谱(配备大气压化学电离源)同时测定婴幼儿配方奶粉中脂溶性维生素A、D、E和K1，但所述样品前处理过程比较复杂，样品需先经过脂肪酶酶解过夜，再进行皂化反应，石油醚提取等步骤，整个流程耗时较长。国际上，Phinney等(K.WPhinney.C.A.Rimmer,J.B.Thomas,L.C. Sander,K.E.Sharpless,S.A.Wise,IsotopeDilution Liquid Chromatography-Mass Spectrometry Methods for Fat-and Water-Soluble Vitamins in Nutritional Formulations. Analytical Chemistry,2011,83(1):92-98.)也报道了采用液相色谱-质谱测定婴幼儿配方奶粉中脂溶性维生素A、D、E和K₁的方法，定量方法为母离子定量。Tim Plozza等(T.Plozza,V. C.Trenerry,D.Caridi.Thesimultaneous determination of vitamins A,E andβ-carotene in bovine milk byhigh performance liquid chromatography–ion trap mass spectrometry(HPLC–MSn),Food Chemistry 134(2012)559–563)报道了液相色谱-离子阱质谱测定牛乳中维生素A、D和β-胡萝卜素的方法。