[发明专利]一种雷公藤红素-树状大分子缀合物及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种雷公藤红素-树状大分子缀合物，其特征在于由中心树枝状聚酰胺-胺型树枝状有机高分子纳米载体、聚乙二醇、表面靶向配体和雷公藤红素组成，所述中心树枝状聚酰胺-胺型树枝状有机高分子纳米载体、聚乙二醇、表面靶向配体之间通过酰胺共价键连接，所述表面靶向配体包括抗体/适配体；所述聚乙二醇为功能化的聚乙二醇；所述雷公藤红素为抗癌药物雷公藤红素；

所述一种雷公藤红素-树状大分子缀合物的制备方法包括以下步骤：

1)将PAMAM表面的氨基用丁二酸酐进行部分羧基化，透析冷冻干燥，得到PAMAM-COOH衍生物；所述PAMAM的代数为3～6代；PAMAM︰丁二酸酐的质量比为2.25︰1；

2)将PAMAM-COOH衍生物用EDC/NHS活化后，用功能化的聚乙二醇NH2-PEG-COOH修饰，透析冷冻干燥，得到PAMAM-PEG-COOH衍生物；所述PAMAM-COOH︰EDC︰NHS︰NH2-PEG-COOH的质量比为1︰(1～2)︰(0.2～1)︰9；

3)将步骤2)中得到的PAMAM-PEG-COOH衍生物，用EDC/NHS活化后，进一步与EpCAM靶向核酸适配体连接，超滤除去未反应的适配体后，冷冻干燥制备得到多功能化的PAMAM衍生物；所述PAMAM-PEG-COOH︰EDC︰NHS︰EpCAM的摩尔比为1︰(10～50)︰(2.5～12.5)︰4；

4)用溶剂溶解雷公藤红素，进行EDC/NHS活化后；将活化后的雷公藤红素共价络合在步骤3)所得到的多功能化的PAMAM衍生物表面，透析除去多余的雷公藤红素及溶剂，而得到雷公藤红素-树状大分子缀合物；或

用溶剂溶解雷公藤红素，将EDC/NHS活化后的雷公藤红素先共价络合在步骤2)所得到的PAMAM-PEG-COOH衍生物表面，透析除去未反应的雷公藤红素后，用EDC/NHS活化，进行EpCAM抗体的功能化修饰，而得到雷公藤红素-树状大分子缀合物；

雷公藤红素︰EDC︰NHS︰PAMAM-PEG-EpCAM的质量比为50︰180︰25︰166；所述溶剂选自甲醇和水的混合液，所述甲醇与水的体积比为5︰3。

2.如权利要求1所述一种雷公藤红素-树状大分子缀合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)将PAMAM表面的氨基用丁二酸酐进行部分羧基化，透析冷冻干燥，得到PAMAM-COOH衍生物；所述PAMAM的代数为3～6代；PAMAM︰丁二酸酐的质量比为2.25︰1；

2)将PAMAM-COOH衍生物用EDC/NHS活化后，用功能化的聚乙二醇NH2-PEG-COOH修饰，透析冷冻干燥，得到PAMAM-PEG-COOH衍生物；所述PAMAM-COOH︰EDC︰NHS︰NH2-PEG-COOH的质量比为1︰(1～2)︰(0.2～1)︰9；

3)将步骤2)中得到的PAMAM-PEG-COOH衍生物，用EDC/NHS活化后，进一步与EpCAM靶向核酸适配体连接，超滤除去未反应的适配体后，冷冻干燥制备得到多功能化的PAMAM衍生物；所述PAMAM-PEG-COOH︰EDC︰NHS︰EpCAM的摩尔比为1︰(10～50)︰(2.5～12.5)︰4；

4)用溶剂溶解雷公藤红素，进行EDC/NHS活化后；将活化后的雷公藤红素共价络合在步骤3)所得到的多功能化的PAMAM衍生物表面，透析除去多余的雷公藤红素及溶剂，而得到雷公藤红素-树状大分子缀合物；

雷公藤红素︰EDC︰NHS︰PAMAM-PEG-EpCAM的质量比为50︰180︰25︰166；所述溶剂选自甲醇和水的混合液，所述甲醇与水的体积比为5︰3；

用溶剂溶解雷公藤红素，将EDC/NHS活化后的雷公藤红素先共价络合在步骤2)所得到的PAMAM-PEG-COOH衍生物表面，透析除去未反应的雷公藤红素后，用EDC/NHS活化，进行EpCAM抗体的功能化修饰，而得到雷公藤红素-树状大分子缀合物；

所述雷公藤红素︰EDC︰NHS︰PAMAM-PEG-COOH聚合物的质量比为＝2︰4.22︰0.5︰20。

3.如权利要求2所述一种雷公藤红素-树状大分子缀合物的制备方法，其特征在于在步骤1)和4)中，所述透析袋截留分子量为3.5KD；步骤2)中所述透析袋截留分子量为14KD；步骤3)所述超滤管的截留分子量为30KD。

4.如权利要求1所述雷公藤红素-树状大分子缀合物在制备治疗结肠癌、肝癌、乳腺癌EpCAM表面膜蛋白丰富的癌症药物中的应用。