[发明专利]一种基于MOFs材料竞争型电化学免疫传感器的制备方法

权利要求书

1.一种基于MOFs材料竞争型免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）UiO-66的制备

将1~2 g四氯化锆和1~2 g对苯二甲酸和10~20 mL盐酸超声溶解于100 mL的N，N-二甲基甲酰胺DMF，然后转移至高压釜，在120 ℃下反应12~24 h，反应结束后，将所得到的混合物在9000 r/min离心10 min，用N，N-二甲基甲酰胺和甲醇分别洗涤三次，弃去上清液，将离心管放入60 ℃真空干燥箱干燥，最后经过研磨得到白色固体粉末UiO-66；

（2）UiO-66/Au的制备

称取0.1~0.2 g UiO-66在室温下超声分散于10~20 mL甲醇中，得到白色均匀乳浊液，加入0.3~0.4 mL氯金酸混合，在室温下搅拌5 h得到黄色乳浊液，称取0.06~0.07 g硼氢化钠超声溶解于10~20 mL甲醇后，逐滴加入到上述黄色乳浊液后迅速变为红棕色，此时Au³⁺被还原为Au，继续搅拌2 h，将所得到的混合物用9000 r/min离心5 min并用乙醇洗涤3次，将离心管放入60 ℃真空干燥箱干燥12 h，最后经过研磨得到UiO-66/Au；

（3）NH₂-MIL-125的制备

将0.7~0.9 g 2-氨基对苯二甲酸溶于DMF和乙醇混合溶剂V_DMF:V_乙醇=5：5中，然后将0.5~1.0 mL钛酸异丙酯加入到溶液中，通过超声波震荡10分钟搅拌后，将混合物转移到25 mL高压釜中，并在静态条件下置于150 ℃的烘箱中24 h，反应后，通过离心收集产物并用DMF和乙醇洗涤数次，然后在60 ^oC下干燥过夜；

（4）NH₂-MIL-125-CEA的制备

将上述NH₂-MIL-125取2~4 mg溶解在1~2 mL PBS缓冲液中并加入0.5 mL NHS和0.5 mLEDC，之后再加入1~2 mL CEA，在低温环境中将溶液振荡12 h以上，然后在4 ^oC下离心，除去上清液，将所得沉淀用PBS缓冲液离心洗涤，最后加入1~2 mL PBS缓冲液使沉淀溶解，得到NH₂-MIL-125-CEA；

（5）将玻碳电极用抛光粉打磨，再使用去离子水清洗，将电极置于5 mmol/L 铁氰化钾溶液中，并在-0.2~0.6 V电位下进行扫描，使峰电位的差值小于110 mV；

（6）将6 μL，1~2 mg/mL UiO-66/Au溶液滴加在电极上，室温下干燥；

（7）将6 μL，10~20 μg/mL癌胚抗原CEA的抗体滴加在电极上，室温下干燥之后，用PBS清洗，除去多余抗体，室温下干燥；

（8）将3 μL，质量分数为1~2 % BSA溶液滴加于电极上，用以封闭非特异性结合位点，干燥之后使用PBS洗去多余BSA；

（9）将6 μL不同浓度的CEA滴加到电极上，室温下干燥并用PBS洗涤；

（10）将6 μL，1~2 mg/mL NH₂-MIL-125-CEA溶液滴加于电极上，室温下干燥后用PBS洗去多余的抗原，室温下干燥，竞争型免疫传感器的制备完成；

（11）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的电化学免疫传感器为工作电极；

（12）使用方波伏安法，在15 mL、40~60 mmol/L、6.0~8.0 pH的铁氰化钾的PBS缓冲溶液中进行检测，输入电压为-0.2~0.6 V，扫描速度为50 mV/s，绘制工作曲线；

（13）将待测样品溶液代替CEA的标准溶液进行检测。