[发明专利]细胞内检测生物分子间相互作用及其调控因子的方法与所用试剂

权利要求书

1.检测细胞内生物分子间相互作用的方法，待测生物分子名称为X和X_L，所述X为蛋白质，所述X_L为蛋白质，所述方法包括U1)和U2)：

U1)连接名称为R的生物分子和所述X，将得到的重组分子记为R-X；所述R含有固有无序蛋白/区域；连接所述X_L与名称为J的报告基团，将得到的重组分子记为X_L-J；

U2)将所述R-X与所述X_L-J导入生物细胞中，得到重组细胞，检测所述重组细胞中所述J的信号是否在所述固有无序蛋白/区域所形成的第二相中聚集，确定所述X和所述X_L间是否具有相互作用：如所述J的信号在所述第二相中聚集，所述X和所述X_L间具有或候选具有相互作用；如所述J的信号在所述第二相中没有聚集，所述X和所述X_L间不具有或候选不具有相互作用。

2.鉴定细胞内生物分子间互作调控因子的方法，待测生物分子名称为X和X_L，所述X为蛋白质，所述X_L为蛋白质，所述X和所述X_L间具有相互作用，所述方法包括V1)和V2)：

V1)连接名称为R的生物分子和所述X，将得到的重组分子记为R-X；所述R含有固有无序蛋白/区域；连接所述X_L与名称为J的报告基团，将得到的重组分子记为X_L-J；

V2)将所述R-X与所述X_L-J导入生物细胞中，得到重组细胞；培养所述重组细胞，向所述重组细胞的培养体系中添加待测调控因子，得到待测体系；培养所述重组细胞，得到对照体系；然后检测所述待测体系和所述对照体系中所述重组细胞中所述J的信号在所述固有无序蛋白/区域所形成的第二相中的强度，确定所述待测调控因子对所述X和所述X_L间的相互作用是否具有调控作用：如所述J的信号在所述待测体系的第二相中高于所述对照体系，所述待测调控因子对所述X和所述X_L间的相互作用具有或候选具有促进作用；如所述J的信号在所述待测体系的第二相中等于所述对照体系，所述待测调控因子对所述X和所述X_L间的相互作用不具有或候选不具有调控作用；如所述J的信号在所述待测体系的第二相中低于于所述对照体系，所述待测调控因子对所述X和所述X_L间的相互作用具有或候选具有抑制作用。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述R还含有名称为K的报告基团，所述K不同于所述J。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述J和所述K为荧光报告基团。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述荧光报告基团为荧光蛋白质。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述固有无序蛋白/区域为H1)或H2)或H3)：

H1)氨基酸序列是序列1的第258-772位所示的蛋白质；

H2)将序列表中序列1的第258-772位所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；

H3)在H1)或H2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述R中所述K和所述固有无序蛋白/区域通过连接区或化学键相连。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述X_L-J中所述X_L和所述J通过连接区或化学键相连；

和/或，所述R-X中所述R和所述X通过所述连接区或化学键相连。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述连接区为(Gly-Gly-Ser)_n或含有(Gly-Gly-Ser)_n的多肽，n为大于等于2的自然数。