[发明专利]一种基于金功能化钛掺杂溴氧铋微球的电化学发光传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种基于金功能化钛掺杂溴氧铋微球的电化学发光传感器的制备方法及应用，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将直径为4 mm的玻碳电极用氧化铝粉打磨抛光至镜面，再用超纯水洗涤干净；

（2）将6 µL、浓度为4～14 mg·mL^-1金功能化钛掺杂溴氧铋微球的水溶液滴涂到电极表面，室温保存至干燥；

（3）滴涂6 μL、浓度为2～14 μg·mL^-1的N-端脑钠肽前体的抗体溶液于玻碳电极表面，4℃下保存至干燥，超纯水清洗；

（4）滴涂3 μL、质量分数为1%的牛血清白蛋白，封闭非特异性活性位点，4 ℃下保存至干燥，超纯水清洗；

（5）将6 μL、浓度为0.001-50 ng·mL^-1的一系列不同浓度的N-端脑钠肽前体滴涂在电极表面，4 ℃下保存至干燥，超纯水清洗，即制得检测N-端脑钠肽前体的电化学发光传感器。

2.如权利要求1所述的一种基于金功能化钛掺杂溴氧铋微球的电化学发光传感器的制备方法及应用，所述金功能化钛掺杂溴氧铋微球，其特征在于，制备步骤如下：

（1）钛掺杂溴氧铋微球的制备

将0.4～0.8 g Bi(NO₃)₃·5H₂O溶解到60 mL 2-甲氧基乙醇中，搅拌使其形成澄清溶液，然后缓慢加入1.2 g十六烷基三甲基溴化铵和0.3 mL钛酸四丁酯，磁力搅拌30 min后将上述溶液转移至反应釜中，160 ℃反应24 h；冷却至室温后，离心、洗涤、干燥得到钛掺杂溴氧铋微球；

（2）金功能化钛掺杂溴氧铋微球的制备

将0.3～0.5 g上述制备的钛掺杂溴氧铋微球分散到100 mL超纯水中，超声1 h后，用氨水调节溶液pH至11；将5 mL、质量分数为1%的HAuCl₄逐滴加入到上述溶液中，50 ℃下磁力搅拌5 h，离心、洗涤、干燥后得到金功能化钛掺杂溴氧铋微球。

3.如权利要求1所述的电化学发光传感器用于N-端脑钠肽前体的检测，其特征在于，步骤如下：

（1）将Ag/AgCl电极作为参比电极、铂丝电极作为对电极、所制得的电化学发光传感器作为工作电极，连接在化学发光检测仪的暗盒中，将电化学工作站和化学发光检测仪连接在一起；

（2）化学发光检测仪参数设置为，光电倍增管的高压设置为750 V，扫描速率设置为0.1V/s；

（3）电化学工作站参数设置为，循环伏安扫描电位范围为-1.8～0 V，扫描速率设置为0.1 V/s；

（4）使用含100 mM KCl和40～140 mM K₂S₂O₈的PBS缓冲溶液作为测试底液，通过电化学发光法检测不同浓度的N-端脑钠肽前体产生的电化学发光信号强度；所述PBS缓冲溶液，其pH=5.5～8.5，用0.1 M Na₂HPO₄和0.1 M KH₂PO₄配制；

（5）根据所得的电化学发光强度值与N-端脑钠肽前体浓度对数的线性关系，绘制工作曲线。