[发明专利]一种污泥中蛋白质的提取方法及应用

权利要求书

1.一种污泥中蛋白质的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)、采用超声波与木瓜蛋白酶联合处理污泥，得蛋白质粗提液；

11)、取污泥，利用超声波破坏微生物细胞表面的细胞壁结构，其中，超声功率为150-200W，时间为30-50min，以污泥总悬浮固体(TSS)值为基准，每克TSS加入0.03-0.05g木瓜蛋白酶，并放到温度为55-65℃，转速为150-170r/min的恒温振荡器中4-6h进行水解，水解完成后在沸水中灭活，得处理后的污泥；

12)、对处理后的污泥进行冷却，并将其在8000-11000g的条件下离心15-25min后弃沉淀，离心后的上清液即为蛋白质粗提液；

2)、采用硫酸铵沉淀法与透析袋吸附法耦合的方式纯化并浓缩蛋白质粗提液，得蛋白质精提液；

21)、向每升蛋白质粗提液中缓慢加入200-400g硫酸铵固体，搅拌5-7h后在2-6℃条件下静置1h以上，之后，将静置后的液体在2-6℃，8000-11000g下离心10-20min，弃掉上清液得到沉淀；

22)、将步骤21)中得到的沉淀溶于蒸馏水至全部溶解后放入透析袋中，其中，所述透析袋的规格为15000-25000Da，外部为缓冲溶液，透析24h以上，取出透析袋放到空烧杯中，在透析袋表面均匀撒上分子量与透析袋的截留分子量相同的聚乙二醇，2-4h后得到浓缩液，即为蛋白质精提液。

2.按照权利要求1所述的污泥中蛋白质的提取方法，其特征在于：步骤11)中，向污泥中添加的木瓜蛋白酶的添加量为0.04g/gTSS。

3.按照权利要求1所述的污泥中蛋白质的提取方法，其特征在于：步骤11)中，恒温振荡器的转速为160r/min，温度60℃，水解时间为5h。

4.按照权利要求1所述的污泥中蛋白质的提取方法，其特征在于：步骤12)中，冷却后的污泥在10000g的条件下离心20min，离心后的上清液即为蛋白质粗提液。

5.按照权利要求1所述的污泥中蛋白质的提取方法，其特征在于：步骤21)中，硫酸铵固体的添加量为300g/L，搅拌时间为6h。

6.按照权利要求1所述的污泥中蛋白质的提取方法，其特征在于：步骤21)中，静置后的液体在4℃，10000g下离心15min，弃掉上清液得到沉淀。

7.按照权利要求1所述的污泥中蛋白质的提取方法，其特征在于：步骤22)中，所述透析袋的规格为20000Da，透析时间为24h。

8.利用权利要求1至7中所述的污泥中蛋白质的提取方法提取出来的蛋白质在生产叶面肥上的应用，其特征在于：利用所述方法提取出来的蛋白质作为生产叶面肥的原料。