[发明专利]ADAMTS6基因及其shRNA序列及在抗人肺癌中的应用

说明书

本发明公开一种用于抑制抗人肺癌的基因ADAMTS6及其shRNA，所述shRNA包括SEQ ID NO:2/SEQ ID NO:3所示序列。本发明设计的特异性shRNA序列可以有效靶向抑制ADAMTS6基因的表达，为未来肺癌基因治疗提供高效和便捷的手段。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及ADAMTS6基因及其shRNA序列及在抗人肺癌中的应用。

背景技术

肺癌已成为我国人群最常见的恶性肿瘤之一，以其高死亡率威胁我国城镇居民健康。随着人口经济社会的高速发展，肺癌的发病率也在急剧增长。许多研究指明，在我国肺癌已成为一种危害公共健康的严重疾病，急切需要行而有效的策略来控制其损害^[1]。

基质金属蛋白酶(a disintegrin and metalloproteinase withthrombospondin motifs， ADAMTS)属于多结构域细胞外蛋白酶家族，根据功能的不同主要包括19个成员，其主要参与分泌多结构基质相关的锌金属内肽酶，其在组织形态发生和病理生理重塑，炎症和血管生物学中具有不同的功能^[2]。在肿瘤研究方面ADAMTS金属蛋白酶显示出肿瘤和抗肿瘤作用，其抗肿瘤作用是蛋白酶依赖性和非依赖性的，并且ADAMTS金属蛋白酶的肿瘤效应主要由它们的蛋白水解活性介导^[3]。例如，Rocks等研究者发现ADAMTS-1金属蛋白酶通过体内诱导的基质反应促进肿瘤发展，过表达ADAMTS-1与纤连蛋白、转化生长因子β和白细胞介素-1β的产生增加有关^[4]。Dunn等研究者表明具有抗血管生成特性的分泌蛋白酶ADAMTS-8在脑肿瘤中的表达下调，通过qRT-PCR反应检测到在脑肿瘤和脑胶质瘤细胞系中ADAMTS-8的mRNA水平较正常全脑水平降低，甲基化特异性PCR 显示在24种脑肿瘤以及3种脑胶质瘤中ADAMTS-8启动子呈现高甲基化状态^[5]。Chen 等研究者表明ADAMTS4在结直肠癌患者组织的呈现高表达状态并且高表达ADAMTS4 的患者表现为较差的预后，敲减ADAMTS4可以抑制结直肠癌在裸鼠体内的生长，且通过TCGA数据库分析ADAMTS4相关基因主要富集在趋化因子信号通路和细胞因子-细胞因子受体相互作用信号通路^[6]。

ADAMTS6位于5号染色体长臂1区2带3亚带，其表达可受细胞因子TNF-α与 TGF-β调节^[6,7]。目前有关于ADANTS6在肿瘤的研究较少，有研究表明ADAMTS6可以通过ERK信号传导途径抑制乳腺癌进展，并且作为人乳腺癌的预后标志物^[8]。Human Protein Atlas数据库是2003年一项于瑞典启动的质谱组学计划，旨在利用整合各种组学技术，绘制细胞、组织和器官中的所有人类蛋白质图谱，学术界和工业界可公开获取此数据库共享的资源。根据HumanProtein Atlas网站预测，ADAMTS6在包括肺癌、结肠癌、乳腺癌和子宫内膜癌等多种癌症中高表达且临床患者的5年生存率降低^[9,10]。

基于RNAi的治疗剂(包括siRNA和shRNA)在针对癌基因的特异性治疗中显示出极大的优势，小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)是一种形成茎环(hairpin turn)结构的RNA序列，可以经由RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默基因表达^[11]。shRNA 通常通过质粒、病毒或细菌载体提呈给宿主细胞基因组，从而特异性敲低靶基因在宿主细胞中的表达。shRNA具有相对低的降解和转换率，且仅需RNAi引导链与靶标间遵循碱基互补配对原则并且快速便捷，因而是RNAi技术在生物医药领域的一项重要应用^[12]。在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中针对ADAMTS6基因的靶向干扰仍未进行深入研究，因此，本技术旨在利用RNAi技术进行ADAMTD6基因有效稳定的干扰敲减，并为肺癌患者提供新的治疗手段和思路。

参考文献